您当前的位置：
首页 > 文献资料
所属专业：
端粒酶催化亚单位启动子文献资料
-
肿瘤特异性结核抗原Ag85A基因慢病毒表达载体构建
目的 构建小鼠端粒酶催化亚单位启动子(murine telomerase catalytic subunit promoter,PmTERT)调控的结核杆菌抗原基因Ag85A肿瘤特异性慢病毒表达载体,为肿瘤靶向性免疫基因治疗的研究奠定基础.方法 用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)方法克隆PmTERT,用荧光素酶(luciferase)活性检测方法研究PmTERT在小鼠和人肿瘤细胞及正常细胞中的转录活性.通过核酸分子克隆方法,分别构建巨细胞病毒(cytomegalo virus,CMV)启动子和PmTERT调控的Ag85A基因慢病毒表达载体,并用基因测序和Western blot方法对重组载体进行鉴定.结果 本研究克隆的331 bp大小的PmTERT在小鼠Lewis肺癌细胞、人A549肺癌细胞、EC-109食管癌细胞中均有转录活性,在小鼠NIH3T3胚胎成纤维细胞和人MRC-5胚肾成纤维细胞中无转录活性;成功构建分别由CMV启动子和PmTERT调控的Ag85A基因慢病毒表达载体pLVX-Ag85A-CMV和pLVX-Ag85A-PmTERT;感染pLVX-Ag85A-CMV的Lewis细胞和NIH3T3细胞均有Ag85A蛋白表达,感染pLVX-Ag85A-PmTERT的Lewis细胞有Ag85A表达,感染pLVX-Ag85A-PmTERT的NIH3T3细胞无g85A表达.结论 PmTERT具有肿瘤特异性转录活性,其驱动的结核杆菌抗原基因可以在肿瘤细胞中靶向性表达.
关键词： 肿瘤 免疫基因治疗 端粒酶催化亚单位启动子 靶向性表达 结核杆菌抗原Ag85A
