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绵羊BMSCs与光接枝改性前后聚羟基丁酸-羟基异戊酯共培养的对比研究
目的 评价光接枝改性对聚羟基丁酸-羟基异戊酯(copolymers of 3-hydroxybutyrate and 3-hy-droxyvalerate,PHBV)与绵羊BMSCs相容性的影响. 方法 取6月龄雄性绵羊1只,体重17 kg,髂后棘穿刺抽取骨髓,全骨髓贴壁培养法分离培养BMSCs.制备PHBV膜、光接枝PHBV膜、PHBV支架及光接枝PHBV支架.取第3代BMSCs以1 ×105/mL接种至培养板,分别与PHBV膜和光接枝PHBV膜复合培养,接种后1、2、6 h计算细胞在两种膜上的黏附率;另将BMSCs以1×104/孔接种于两种膜上,接种后6 h、3 d及1、3周取材,扫描电镜观察细胞在两种膜上的生长情况;另将BMSCs以2×105/孔接种于两种支架上,接种后3 d及1、3周取材,扫描电镜观察细胞在两种支架上的生长情况;再将BMSCs以2 × 104/孔接种于两种膜上,5 d后收集细胞,流式细胞仪分析细胞周期;再将BMSCs以1 ×107/孔接种于两种支架上,接种后4、8、12d测定细胞内蛋白质和DNA含量. 结果 接种后1 h,PHBV膜上的细胞黏附率为37.5%±5.3%,光接枝PHBV膜为52.7%±6.0%,二者比较差异有统计学意义(P＜0.05);接种后2、6 h,两种支架上的细胞黏附率比较差异无统计学意义(P＞0.05).扫描电镜观察:光接枝PHBV膜以及光接枝PHBV支架上的细胞黏附较早,接种后1周两种材料上的细胞数较多,且细胞分泌物亦较多.流式细胞仪检测见两种膜上的BMSCs均为正常二倍体细胞,未见异倍体细胞,细胞周期和增殖指数比较差异均无统计学意义(P＞0.05).BMSCs接种至两种支架上4、8、12 d,细胞内DNA、蛋白质含量比较差异均无统计学意义(P＞0.05). 结论 光接枝表面改性增强了PHBV对绵羊BMSCs的早期吸附,改善了其生物相容性.
关键词： 组织工程 聚羟基丁酸-羟基异戊酯 BMSCs 光接枝反应改性 支架材料
