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超滤离心法降低重组人脱细胞真皮基质牛血清白蛋白残留量检测中基质效应的实验研究
目的 探讨采用超滤离心法减少重组人脱细胞真皮基质(recombination human acellular dermal matrix,rhADM)样品浸提液对ELISA方法检测牛血清白蛋白(bovine semm albumin,BSA)残留量的基质效应.方法 清洗rhADM后,制备rhADM生理盐水浸提液.取超滤离心管若干,分别加入1 mg/mL BSA溶液(预饱和方式1,记作PR1)、10μg/mL BSA溶液(预饱和方式2,记作PR2)和rhADM浸提液2 mL(记作rhADM1和rhADM2),1 500×g离心20 min,重复操作3次后取出离心管内管,放入未使用的15 mL离心管中,在PRI和PR2管中加入10μg/mL BSA溶液4 mL,rhADM管中加入rhADM浸提液4 mL,同上法离心后,收集滤液.用ELISA法测定BSA含量.计算不同预饱和方式下10μg/mL BSA溶液的BSA回收率(以未经处理的10μg/mL BSA溶液作为基础样品,分别记作R10和R20);计算滤液稀释倍数的对数与测定吸光度(A)值的相关系数,并与未经超滤离心处理的浸提液检测结果进行比较.结果 采用预饱和方式1处理后,PRI1BSA浓度为(23.80±1.58)μg/mL,R10为(9.04±0.24)μg/mL,BSA回收率为263.4%±16.9%.采用预饱和方式2处理后,PR2 BSA浓度为(8.64±0.24)μg/mL,R20为(8.12±1.01)μg/mE,BSA的回收率为106.5%±3.O%.预饱和方式2的回收率符合检测要求.不同预饱和方式下BSA回收率差异有统计学意义(P＜0.01).经超滤离心处理后,滤液稀释倍数的对数与A值之间的相关性明显提高,相关系数由-0727提高至-0.960.超滤处理后的相关系数符合检测要求.结论 超滤离心处理可以有效减少rbADM样品浸提液的基质效应对BSA残留量检测的影响;样品浸提液自身对超滤离心管的预饱和处理,可得到较为理想的BSA回收率.
关键词： 牛血清白蛋白残留量 重组人脱细胞真皮基质 超滤离心 基质效应
