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BMP-2/7文献资料
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腺病毒介导BMP-2/7共表达转染兔滑膜MSCs体外向纤维软骨样细胞分化的研究
目的 通过使用腺病毒介导BMP-2/7共表达载体转染兔滑膜MSCs (synovial-derived MSCs,SMSCs),观察其在体外向纤维软骨样细胞分化的可行性.方法 取3月龄新西兰大白兔6只,雌雄不限,体重(2.1±0.3)kg；取滑膜组织分离纯化SMSCs后,进行形态学观察及免疫细胞荧光染色、流式细胞仪、细胞周期鉴定,并检测其成脂、成骨、成软骨多向分化潜能.同时包装pAdTrack-BMP-2-内部核糖体进入位点(internal ribosome entry site,IRES)-BMP-7腺病毒载体,转染SMSCs后进行增殖动力学、核型分析、流式细胞仪检测细胞DNA含量、致瘤性分析等安全性鉴定.体外在不完全成软骨培养基中培养,观察其分化状态,并行RT-PCR检测、免疫荧光染色及甲苯胺蓝染色检测.结果 从兔滑膜组织中分离出的SMSCs,其细胞形态、表面标记、多向分化潜能等均符合MSCs的特点.pAdTrack-BMP-2-IRES-BMP-7转染SMSCs的转染率约为70％.安全性鉴定结果显示转染后的SMSCs倍增时间、染色体数目及DNA含量均正常,且无致瘤性.体外不完全成软骨培养基诱导培养21d后,RT-PCR检测示SMSCs的Ⅰ、Ⅱ型胶原表达明显增加,以Ⅱ型胶原为主；软骨分化信号分子RhoA与Sox-9的表达经诱导后也明显增加.免疫荧光染色及甲苯胺蓝染色结果亦显示转染后的SMSCs向纤维软骨样细胞分化.结论 使用腺病毒载体安全有效,可在体外定向诱导兔SMSCs向纤维软骨样细胞分化.
