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透化文献资料
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用于RhD抗原流式细胞检测的固定透化方法评价
目的 寻找具有回收率高且适于RhD抗原荧光检测的红细胞固定透化方法.方法 分别采用4％甲醛、4％多聚甲醛、2％戊二醛对红细胞进行固定,同时采用4％甲醛-Triton X-100、4％多聚甲醛-Triton X-100、2％戊二醛-Triton X-100对红细胞进行透化固定,未处理红细胞作为对照.冰上固定20 min,洗涤后计算红细胞回收率.在各组红细胞中加入1∶128的RhD IgG单克隆抗体,同时设组内空白对照,37℃孵育30 min.PBS洗涤3次后加入1∶200的FITC荧光抗体,37℃孵育30 min,PBS洗涤3次后流式细胞仪检测.结果 2％戊二醛及2％戊二醛-Triton X-100 2组的回收率分别为72.83％与72.80％,高于对照组(58.32％),甲醛及多聚甲醛2组的回收率在4.00％左右,远低于对照组.流式检测结果显示,不同固定剂的荧光本底均高于未处理红细胞.与对照组相比甲醛与多聚甲醛会减弱RhD抗原荧光强度,而戊二醛不影响RhD荧光强度,戊二醛-Triton X-100可增强RhD抗原检测的灵敏度.结论 2％戊二醛-Triton X-100固定透化法不仅可得到较高的红细胞回收率,且RhD荧光检测的灵敏度也得到提升,是荧光检测RhD抗原较理想的固定透化方法.
