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LipL32-HlyX融合基因文献资料
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赖型钩端螺旋体LipL32-HlyX融合基因真核表达载体的构建及在COS7细胞中融合表达的研究
从赖型钩端螺旋体017株全基因组中通过聚合酶链反应(Polymerase chain reaction,PCR)分别扩增出脂蛋白32(LipL32)和溶血素-X(HlyX)基因,应用重叠延伸PCR技术(Gene splicing by overlap extension PCR,SOE PCR)获得LipL32-HlyX融合基因.以pcDNA3.1为载体,LipL32-HlyX为目的基因,双酶切构建重组质粒.将重组质粒转化大肠杆菌DH5α,经双酶切、PCR及测序鉴定证实重组质粒构建成功.脂质体转染法将构建成功的重组质粒转染COS7细胞,RT-PCR扩增出约2 000 bp的目的基因,Western blotting分析发现在75 KD处出现特异性的阳性条带.结果证实赖型钩端螺旋体LipL32-HlyX融合基因真核表达载体能在哺乳动物细胞中表达,为钩体DNA疫苗的研究和开发奠定了基础.
关键词： 钩端螺旋体 LipL32-HlyX融合基因 真核表达
