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重组甘油激酶文献资料
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高纯度诊断用重组甘油激酶的制备和鉴定
用乳糖诱导重组甘油激酶(r-GK)在E.coli中高效表达,经300 L发酵罐发酵培养,建立了高效、低成本的r-GK发酵生产工艺.发酵菌体终密度OD600值达到42,r-GK表达量占菌体可溶性蛋白的30％左右.菌体破碎液经选择性热变性处理,Ni Sepharose FF层析二步纯化,产物纯度大于97％.经梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳(Gradient PAGE)、聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)和十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定,r-GK分子量为120 kDa,由分子量相同的2个亚基组成.甘油激酶中2种NADH氧化酶和过氧化氢酶干扰酶未被检出.保存稳定性实验表明纯化后酶液在4℃条件下保存30d可保留约85％的活性,而冻干粉剂在4℃条件下保存1年活性仍可保留93％以上.
