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中间神经元前体细胞株GE6在不同分化条件下小RNA的表达
本研究通过分析小RNA(microRNAs)在大鼠大脑中间神经元前体细胞株GE6体外分化中的表达,筛选出在中间神经元前体细胞系分化成熟过程中特异性表达的小RNA,并预测分析其可能在此过程中的功能.实验中,将GE6在三种不同条件下培养,即:不加入任何其他生长因子,正常分化培养4天的GE6 (Ge6_4d);加入骨形态发生蛋白-2 (BMP2)后分化培养4天的GE6(Ge6_ bmp2);以及加入音猥因子(SHH)后分化培养4天的GE6(Ge6-shh).设阴性对照组为未分化的GE6(Ge6 u).四组GE6细胞进行细胞免疫荧光染色、qRT-PCR以及小RNA芯片检测分析.通过四组细胞的两两比较、筛选及分析发现,多种小RNA在GE6细胞的分化过程中含量有明显变化.miR-710、miR-290-5p和miR-3473等在加入分泌因子BMP2的GE6细胞中含量显著上调.这些小RNA可能对大鼠中间神经元分化起到重要的调控作用.
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γ-分泌酶抑制剂DAPT对神经前体细胞系分化的作用研究
本研究目的为探究γ-分泌酶抑制剂DAPT(3,5-二氟苯乙酰-L-丙氨酰-S苯基甘氨酸t-丁酯)对神经元前体细胞系分化的影响,检验经DAPT诱导产生更多可用于移植的神经元的可能性.培养神经元前体细胞系GE6时,以培养基中加入4 μmol/L DAPT的为实验组,不加DAPT的为对照组,分化4d,采用免疫荧光染色的方法分别检测两组细胞Tuj1、GFAP、O4的阳性率,采用qRT-PCR分别检测两组细胞Tuj1 mRNA、GFAP mRNA相对表达量.免疫荧光染色表明实验组Tuj1阳性率较对照组增加,而GFAP和O4的阳性率较对照组减少,这些差异均有统计学意义(P＜0.05).qRT-PCR中两组Tuj1和GFAP mRNA的变化趋势与免疫荧光染色结果一致.结果提示DAPT能促进神经元前体细胞系向神经元分化,抑制其向胶质细胞分化,可以用DAPT诱导产生更多的可用于移植的神经元.
