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猪PCV2 ORF2蛋白I-ELISA检测方法的建立及猪场血清抗体检测分析
目的 用猪PCV2ORF2蛋白建立ELISA检测方法,有效区分猪圆环病毒1型(PCV1)和猪圆环病毒2型(PCV2),并进行大规模化样本检测.方法 以猪PCV2ORF2蛋白作为包被抗原,以抗PCV2阳性血清为一抗,羊抗猪酶标物为二抗,通过预试验确定诱导温度、诱导时间、摇动转速、IPTG浓度以及反应板种类等参数,从而建立间接酶联免疫吸附方法(I-ELISA)以检测抗PCV2猪血清抗体滴度.结果 采用本研究建立的ELISA方法测定山东省内4个猪场送检的316份猪血清,检出PCV2阳性率处于较高水平,表明猪群携带病毒比例很高.结论 本试验建立的间接ELISA检测方法敏感度高、特异性强,可用于临床PCV2血清抗体的检测,为ELISA诊断试剂盒的研制开发奠定了基础,为建立规模化猪场PCV2感染的快速诊断方法提供了科学依据.
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抗猪囊虫单克隆抗体的制备及应用
目的利用杂交瘤技术制备抗猪囊虫单克隆抗体,建立抑制性酶联免疫吸附法I-ELISA并应用于临床.方法运用自提的猪囊虫囊液与福氏不完全佐剂加干扰素混合免疫Balb/c小鼠,取小鼠脾淋巴细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,反复筛选及克隆化;用低温无水乙醇沉淀法分离纯化单抗IgG(腹水抗体效价1:3200);用改良的过碘酸钠法制备辣根过氧化物酶标单抗;用I-ELISA检测患者脑脊液和血清中囊虫特异性抗体.结果获得了3株稳定分泌抗猪囊虫单克隆抗体的杂交瘤细胞株,单抗的免疫球蛋白亚类鉴定为2株IgG3,1株IgM.标记的HRP-IgG酶标单抗,经临床病例标本验证,确诊的脑囊虫病患者脑脊液63例,抗体阳性61例,阳性率为96.83%;血清标本60例,抗体阳性53例,阳性率为88.33%;其他颅内感染性疾病患者脑脊液标本240例、血清标本240例,肝肺包虫病患者血清10例,正常脑脊液25例(阑尾炎手术腰麻患者),健康志愿者血清32例,检测结果均为阴性.结论本研究制备的HRP-IgG酶标单克隆抗体经临床应用,证实对脑囊虫病有良好诊断价值.
