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FGFR1Ⅲc文献资料
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靶向bFGF与FGFR1Ⅲc结合位点的单克隆抗体制备及其生物学活性研究
目的 针对碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)与成纤维生长因子受体1c(FGFR1Ⅲc)的结合位点,制备鼠抗人bFGF单克隆抗体并研究其生物学活性.方法 用重组表达的人bFGF免疫Balb/c小鼠,取小鼠脾脏常规融合制备杂交瘤细胞,通过间接和竞争ELISA筛选出与FGFR1Ⅲc有共同结合位点的抗bFGF单抗.制备小鼠腹水并利用Protein G亲和柱纯化腹水单抗,SDS-PAGE鉴定纯化产物;间接ELISA测定单抗亚类、亲和常数,竞争ELISA测定抗体IC50; Western blot和免疫荧光对单抗的生物学活性初步鉴定;CCK-8法检测单抗对肺癌细胞株LL/2的增殖抑制活性.结果 筛选出了2株稳定表达bFGF抗体的细胞株MabE12和MabD9,竞争ELISA测得其IC50分别为1.564和1.96 μg/ml,免疫球蛋白分类两者均为IgG1,间接ELISA测得MabE 12的亲和常数为5.66×108L/mol; Western blot和免疫荧光表明该抗体能与LL/2细胞内天然合成的bFGF相结合,并对其增殖产生了较明显的抑制作用.结论 成功建立了1株能特异性识别bFGF-FGFR1Ⅲc合位点的单抗,能有效的中和bFGF对肺癌细胞株LL/2促增殖作用,为研究肿瘤治疗途径奠定了基础.
