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相思子毒素B链文献资料
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重组相思子毒素B链蛋白的制备与分析
目的 构建、表达和纯化相思子毒素B(ATB)链蛋白并分析其抗原性和毒性.方法 运用密码子优化软件优化ATB基因,合成目的基因亚克隆至原核载体pQE-80L构建表达质粒pQE80L-ATB,转化至E.coliM 15获得表达工程菌株,并对诱导表达条件和纯化条件进行优化;通过Western blot检测重组蛋白的抗原性;采用人正常肺上皮细胞Beas-2B和胃黏膜细胞GES-1进行重组蛋白的细胞毒性实验.结果 ATB开放阅读框架全长804 bp,编码268个氨基酸残基;表达工程菌株在30℃、1 mmol/L IPTG,3h后获得包涵体形式表达的目的蛋白,相对分子质量均约为30 000,经Ni-NTA亲和层析柱纯化后纯度达97％以上,Western blot和MTS实验结果表明,目的蛋白能特异性识别抗相思子毒素多克隆抗体且无毒性.结论 重组ATB蛋白实现高表达,具有良好的抗原性,为相关疫苗研究奠定基础.
