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通过体内传代和流式分选建立稳定转染MUC1 VNTR的B16细胞株
目的 获得具有较好致瘤性、在动物体内保留表达外源基因MUC1 VNT R(mucin 1,variable number tandem repeats)能力的稳定转染细胞株B16-GFP-MUC1,供MUC1靶向药物研究中体内抑瘤实验所用到的肿瘤模型.方法 用脂质体转染的方法和有限稀释法获得单克隆细胞株;将该细胞株进行体内传代后,流式分选GFP阳性细胞群,并对分选后细胞用有限稀释法进行单克隆化.用流式细胞仪和共聚焦荧光显微镜观察各时期细胞克隆的GFP表达情况 .结果 脂质体转染方法得到的在G418压力选择下存在的细胞B16-1,其G FP阳性细胞比率高为80%左右;致瘤性较差,75 d内仅87.5%小鼠出瘤;体外的稳定性观察中,在无抗生素的培养液中观察5周,其阳性率降至20%左右;经过体内接种后仅有10%左右的肿瘤细胞保留了外源基因的表达.而经过体内传代和流式分选后得到的单克隆细胞群B16-39,其GFP阳性细胞比率＞90%;致瘤性为20 d内100%小鼠出瘤;体外培养8周,GFP阳性的细胞比率＞90%; 体内剥离后的肿瘤细胞的GFP阳性细胞比率均＞90%.结论 对于用于体内动物模型的稳定转染细胞,通过体内传代,流式分选并单克隆化,是获得致瘤性好,体内体外较为稳定的稳定转染细胞株的一个可行方案.
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大蒜素对大鼠心肌缺血/再灌注损伤的药物预适应及抗凋亡作用
目的:探讨大蒜素对在体大鼠心肌缺血/再灌注损伤保护作用及对心肌细胞凋亡的影响.方法: 建立大鼠在体心肌缺血/再灌注损伤模型,将36只大鼠随机分为正常对照组(CON组)、缺血/再灌注损伤组(I/R组)、大蒜素预适应组(G组);各组均测定大鼠心肌梗死范围(IS/AAR%, TTC法)、再灌注后血清肌酸磷酸肌酶同工酶MB(CK-MB)、心肌组织丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)含量,并应用DNA琼脂糖凝胶电泳及原位末端标记法(TUNEL法,共聚焦荧光显微镜)检测各组凋亡细胞及凋亡指数(AI),比较各组间差异.结果: G组较I/R组IS/AAR%(21.85±1.49 vs 44.65±4.65, P＜0.01),CK-MB(986.40±94.01 vs 2044.25±107.28,P＜0.01)、MDA(3.26±0.35 vs 4.96±0.46,P＜0.01)明显降低,SOD(140.20±12.89 vs 73.16±11.22)明显增高;I/R、G组AI较CON组明显增高, G组AI较I/R组明显降低(6.97±1.23% vs 13.99±3.05%, P＜0.01).结论: 大蒜素有明显抗大鼠心肌缺血/再灌注损伤作用,其作用机制可能与抗心肌细胞凋亡作用有关.
