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胭脂鱼文献资料
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胭脂鱼IgM重链基因克隆与表达分析
目的 认识胭脂鱼IgM的结构与功能,研究其免疫应答规律.方法 通过同源克隆和RACE技术构建胭脂鱼IgMμcDNA全长,重组表达恒定区序列并制备抗血清,分别从mRNA水平和蛋白水平检测胭脂鱼IgM各组织及发育早期的表达情况;利用抗血清探究经灭活嗜水气单胞菌免疫后胭脂鱼IgM免疫应答规律.结果 获得胭脂鱼IgMμ cDNA全序列,长2 028 bp,编码580 aa,重组表达IgMμ CH1.区,获得相对分子质量约45 000的重组蛋白,成功制备rIgM多抗,免疫印迹分析可见,anti-rIgM抗血清能够特异性识别rIgM和胭脂鱼血清IgM;各组织RT-PCR结果表明,被检测组织除肌肉、皮肤和心脏外均有IgM表达;发育各时期RT-PCR结果显示,胭脂鱼卵中含有IgM转录本,出膜第30天可明显检测到IgM表达.Western blot检测结果表明,免疫相关组织IgM含量均较高,心脏、皮肤未检测到IgM转录本,却含有大量的IgM蛋白,脑和肌肉始终未检测到IgM蛋白.灭活嗜水气单胞菌免疫实验表明,胭脂鱼在初次免疫第21天菌特异性IgM滴度有明显变化,加强免疫后迅速升高,并在高滴度维持2个月后缓慢降低.结论 成功获得濒危物种胭脂鱼IgMμcDNA全序列及anti-IgM多克隆抗体,为胭脂鱼免疫球蛋白结构分析、免疫监测及抗原诊断提供有力工具.
