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N端脂多糖结合蛋白文献资料
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BAC-TO-BAC昆虫/杆状病毒系统在真核表达人N端脂多糖结合蛋白的研究中的应用
昆虫细胞表达体系自成功表达人β-干扰素以来,已成为制备基因工程产品的优选体系.我们选用该系统成功构建N端脂多糖结合蛋白(tLBP)基因杆状病毒载体并进行重组蛋白的表达,现就该系统在实验研究中的应用及体会报告如下.
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人N端脂多糖结合蛋白基因在sf21昆虫细胞中的表达
目的表达重组人N端脂多糖结合蛋白(truncated lipopolysaccharide binding protein,tLBP).方法通过病毒鉴定、SDS-PAGE、western blot、毛细管电泳、体外结合实验、细胞活性实验对重组病毒及重组蛋白tLBP的分子量、纯度和生物学活性进行分析.结果重组病毒空斑分析确定MOI(multiplicity of infection)为8～10,SDS-PAGE显示感染时间65～72 h为佳表达条件;凝胶扫描显示特异表达蛋白占总产物的9.8%,纯化蛋白的分子量约27 000 u,纯度达95%以上;毛细管电泳显示表达产物呈单一峰型;Lowry法测定约1 L上清液可获9 mg 纯化蛋白;Western blot间接显示表达产物反应带与预期值相符;酶联体外结合实验证实该蛋白可特异结合LPS.应用U937细胞,经LPS(1 ng/mL)刺激与LPS(1 ng/mL)刺激加纯化蛋白(1 μg/mL)对比观察发现,加入纯化蛋白后不同时相点TNF-α含量均有所下降.结论人N端脂多糖结合蛋白在sf21昆虫细胞中获得高效表达,并观察到它在体外具有结合或中和内毒素的活性作用.
