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鲎抗内毒素因子模拟肽中和内毒素的体外研究
目的体外研究以评价鲎抗内毒素因子模拟肽(modeling peptides from the limulus anti-lipopolysaccharide factor,MPLALFs,Ms)中和内毒素(lipopolysaccharide/endotoxin)的活性.方法Ms结合内毒素的活性采用生物传感器技术测定,结合力以反应速率值(Kon)和Kd值表示;中和内毒素活性以鲎试验动态浊度法进行分析.结果生物传感器技术测定结果表明,M1、M2、M3、M4、M6、M8、M1o、M0与LPS 055:B5的亲和力反应速率分别为(840±5.716)、(549±6.532)、(842±6.530)、(627±2.450)、(996±5.716)、(814±8.982)、(556±1.633)和(635±2.449)arc second(弧度/秒),以M4活性强,M1活性弱.M4与LPS的反应Kd值为72.377μmol/L.鲎试验结果与生物传感器测定结果基本一致.结论M4具有较强的体外中和内毒素活性.
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鲎抗内毒素因子模拟肽REMP2体外中和内毒素及抗菌活性的研究
目的 了解鲎抗内毒素因子模拟肽REMP2体外中和内毒素及抗菌活性的作用. 方法以多黏菌素B(PMB)为阳性对照,将REMP2、PMB与内毒素/脂多糖(LPS)溶液混合,使REMP2、PMB反应终浓度分别为100.00、10.00、1.00、0.10、0.01μmol/L,LPS为1 EU/mL.测定各溶液中LPS浓度,计算其中和率;以等渗盐水(NS)作为对照,分别将REMP2及PMB配制成10、20、40、80 μmol/L溶液,LPS配制成100μg/L,分别作用于LPS刺激的小鼠单核巨噬细胞,采用酶联免疫吸附测定法检测其肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量;将REMP2加入大肠杆菌标准菌株菌液中,终浓度为40μmol/L,于加入后10、20、40 min在透射电镜下观察大肠杆菌的形态学变化. 结果浓度为0.10、10.00、100.00μmol/L的REMP2对LPS的中和率与阳性对照的PMB值相近(P>0.05);浓度为10、20、40、80μmol/L的REMP2作用于细胞后,其TNF-α含量[(1175-4-162)、(859-4-122)、(645±142)、(489±102)ng/L]均低于对照组[(3463±218)ng/L,P<0.01].REMP2作用后透射电镜下大肠杆菌内外膜变模糊、毛糙,菌体肿胀,胞质空泡变性. 结论 REMP2具有良好的中和LPs活性及杀菌作用.
