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转录因子c-myb及肝脏激活蛋白对α1(Ⅰ)胶原基因在肝星状细胞中表达的调控作用
目的：了解激活的HSC中c-myb及肝脏组织特异的转录因子—肝脏激活蛋白（liver activator protein，LAP）在α1(Ⅰ)基因表达调控中的作用。 方法：采用链霉蛋白酶，胶原酶原位灌注、Nycodenz密度梯度离心分离大鼠HSC，并进行体外培养使之激活。构建含人α1(Ⅰ)胶原基因启动子片段（-804～+1452或-804～+222碱基）的荧光素酶报告基因质粒。用构建的报告基因质粒与c-myb和（或）LAP表达质粒一起，用阳离子脂质体介导的方法，瞬时共转染激活的HSC。 结果：瞬时共转染LAP表达质粒可明显增强含α1(Ⅰ)基因第一内含子片段的荧光素酶报告基因（PGL3-col）及不含α1(Ⅰ)基因第一内含子的报告基因［PGL3-col（△intron）］报告基因在HSC中的表达[荧光素酶活性分别为每毫克蛋白（587±62）Ｕ对（315±45）U及（326±52）Ｕ对（220±70）Ｕ，t值分别为10.4和3.6，两者P值均小于0.05]。C-myb对这两个报告基因均无反式激活作用。但共转染c-myb及LAP表达质粒，却使PGL3-col报告基因在HSC中的表达增强近3倍［每毫克蛋白（1261±130）Ｕ对（315±45）U，t＝20.6，P＜0.01＝，而共转染反义c-myb及LAP表达质粒，却抑制了LAP对α1(Ⅰ)基因启动子的反式激活作用[每毫克蛋白（334±29）U对（315± 45）U，t＝1.06，P＞0.05]。C-myb的这种作用只在 PGL3-col质粒中观察到。 结论：C-myb在α1(Ⅰ)基因转录调控中起重要作用，而此作用由转录因子LAP及α1(Ⅰ)基因第一内含子中的调控元件介导。
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转录因子LAP反式激活α1(I)胶原基因在肝脏星状细胞中的表达
目的了解激活的肝脏星状细胞(hepatic stellate cell, HSC)中一种肝脏组织特异的转录因子肝脏激活蛋白(liver activator protein, LAP)在α1(I)基因表达调控中的作用.方法采用链霉蛋白酶、胶原酶原位灌注、Nycodenz密度梯度离心分离大鼠HSC,并进行体外培养使之活化.构建含人α1(I)胶原基因启动子片段(-804～+1 452或-804～+222碱基)的荧光素酶报告基因质粒.用构建的报告基因质粒与LAP表达质粒一起,用阳离子脂质体介导的方法,瞬时共转染激活的HSC细胞.α1(I)基因启动子的活性通过测定荧光素酶活性来确定.结果构建的含α1(I)基因第一内含子片段的荧光素酶报告基因(PGL3-col)比不含α1(I)基因第一内含子的报告基因[PGL3-col(△intron)]在HSC中有较强的表达(荧光素酶活性为315±45 U/mg蛋白与220±70 U/mg蛋白,P＜0.05).瞬时共转染LAP表达质粒可明显增强PGL3-col及PGL3-col(△intron)报告基因在HSC中的表达(荧光素酶活性分别为587±62 U/mg蛋白与315±45 U/mg蛋白及326±52 U/mg蛋白与220±70 U/mg蛋白,两者比较,P＜0.05).结论 LAP可以反式激活(诱导)α1(I)基因在活化的HSC中表达,在其转录调控中起重要作用.
