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原核蛋白文献资料
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His-GILZ原核表达载体的构建及其表达与纯化
目的 获取糖皮质激素诱导亮氨酸拉链蛋白(GILZ)的His融合蛋白,为下阶段深入研究GILZ的结构、功能及筛取与其相互作用的蛋白打下基础.方法 利用基因工程技术,BarnH I/Xho I酶切真核表达质粒HA-GILZ/PcDNA3获得GILZ cDNA,重组于能表达6个组氨酸残基的原核表达质粒pET-30a中.然后用该亚克隆重组质粒转化大肠杆茵BL21(DE3),用IPTG诱导表达,用Ni2+-NTA柱纯化.结果 亚克隆获得CILZ/pET-30a高效原核表达重组载体,诱导表达的融合蛋白占细菌总蛋白高达40%以上,纯化的蛋白分子量约为24 kD.结论 成功构建His-GILZ融合蛋白原核表达载体,并高效表达、纯化,为进一步研究其结构功能关系和临床应用奠定了基础.
关键词： 糖皮质激素诱导亮氨酸拉链蛋白 融合蛋白 原核蛋白 构建 纯化
