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红景天对慢性间歇低氧大鼠APE1蛋白表达的影响
目的 观察红景天作用于慢性间歇低氧大鼠模型后脑细胞中APE1蛋白表达变化的情况,探讨其对慢性间歇缺氧的保护作用机制.方法 50只SD大鼠随机分成两组后进行造模成慢性间歇低氧大鼠,实验组予红景天胶囊1粒,380 mg,喂养8周,而对照组常规喂养,8周后用免疫组化法检测大鼠脑细胞APE1蛋白表达阳性率,并抽取动脉血比较两者的差别.结果 对照组慢性间歇低氧大鼠在胞核、胞浆均有较多APE1表达且胞浆表达阳性率高于实验组(P＜0.05),同时,实验组动脉血氧分压也较对照组高,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 APE1蛋白表达与阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征大鼠慢性间歇低氧相关,而红景天可有效降低APE1蛋白表达并对OSAHS大鼠氧化应激损伤起到保护作用.
关键词： 红景天 APE1蛋白 阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征 大鼠 -
APE1和p53蛋白在A549细胞和HeLa细胞中的结合作用
目的 探讨脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶(apurinic/apyrimidinic endonuclease,APE1)和p53蛋白内源性和外源性相互结合作用.方法 将重组质粒pET42a-hAPE1转染E.coli BI21(DE3),应用IPTG诱导GST-APE1蛋白表达,鉴定后经金属螯合层析技术纯化,通过Western blot鉴定纯化蛋白,得到GST-APE1融合蛋白.免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation,Co-IP)和GST蛋白沉降实验分别检测内源性和外源性APE1和p53蛋白结合作用,免疫荧光标记结合激光共聚焦显微镜技术确定APE1和p53蛋白亚细胞定位.结果 转染质粒经IPTG诱导表达,应用SDS-PAGE发现GST-APE1在预期位置64×103处存在阳性条带,“Ni”柱纯化后得到GST-APE1融合蛋白,通过Western blot鉴定.免疫共沉淀和GST蛋白沉降实验证实APE1和p53存在内源性和外源性结合作用.激光共聚焦显微镜观察免疫荧光标记的APE1和p53蛋白均为核浆共表达蛋白,氧化应激处理后,蛋白逐渐由胞浆向胞核移位,二者共定位于核膜处较明显.结论 APE1和p53蛋白在A549和HeLa细胞中存在内源性和外源性结合作用,可能与其转录调控及肿瘤放化疗疗效有关.
