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BG4文献资料
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表达BG4蛋白对人胃癌AGS细胞凋亡和端粒酶逆转录酶表达的影响
目的:构建G-四链体抗体BG4基因的真核表达载体pEGFP-N1-BG4,探讨转染该真核表达载体致BG4蛋白过表达对人胃癌细胞株AGS凋亡和端粒酶逆转录酶表达的影响.方法:以BG4基因原核表达载体pSANG10-BG4为模板,PCR扩增出含有BG4基因的目的片段,经TA克隆与pMD18-T载体连接,测序正确后,经Sac I和Pst I双酶切,与真核表达载体pEGFP-N1连接后转化感受态大肠杆菌DH5α,并进行酶切分析和序列测定,Western blot鉴定BG4蛋白表达;流式细胞术检测细胞周期;DAPI法及HE染色检测各组细胞凋亡;qPCR和West-ern blot检测空白对照组、pEGFP-N1组和pEGFP-N1-BG4组端粒酶逆转录酶mRNA和蛋白表达的变化.结果:酶切分析显示,目的基因条带与预期结果相符,DNA测序表明克隆的BG4基因序列正确,Western blot结果表明转染pEGFP-N1-BG4质粒可以成功表达BG4蛋白.转染pEGFP-N1-BG4质粒可抑制细胞进入S期.DAPI法及HE染色显示,pEGFP-N1-BG4组出现明显的新月形核和核固缩的细胞凋亡现象.qPCR和Western blot结果表明,pEGFP-N1-BG4组端粒酶逆转录酶表达受到抑制.结论:用pEGFP-N1-BG4真核表达载体转染胃癌细胞株AGS可以抑制该细胞端粒酶逆转录酶表达,诱导细胞凋亡.
