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金属镉应答新基因TEF-1δ的致癌力鉴定
目的 前期研究已发现金属镉应答新基因TEF-1δ转染NIH3T3细胞可致其编码蛋白质表达升高而引起细胞转化.本研究的目的是对TEF-1δ基因转化NIH3T3细胞的致癌能力和致瘤性进行鉴定.方法软琼脂集落形成试验和裸鼠成瘤实验.结果所有4株不同的TEF-1δ转染发生转化的NIH3T3细胞在软琼脂培养中均显示锚非依赖性生长能力,形成明显的细胞集落.而非转化对照细胞在软琼脂上则无生长能力.转化细胞和对照细胞分别给裸鼠皮下注射(每组4只,5组共20只),1周后,转化细胞组的绝大部分裸鼠下背部皮下开始出现肿瘤,4周后所有4种不同转化细胞株接种的裸鼠全部长出大小不等的肿瘤,但非转化对照细胞于第5周后仍无一只裸鼠出现肿瘤.提示TEF-1δ转基因转化细胞属恶性转化细胞,具有明显的致癌能力和致瘤作用.结论根据本研究结果及前期发现,可以认为新发现的TEF-1δ是一个镉应答原癌基因.
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TEF-1δ基因真核细胞稳定表达系统的构建与鉴定
目的: 构建TEF-1δ (mouse translation elongation factor-1δ) 的稳定表达系统.方法: 采用磷酸钙介导转染技术和G418细胞筛选法,以pcDNA3.1/V5-His-TOPO为表达载体,构建了TEF-1δ转基因CHO和COS7细胞系,Western Blot分析与鉴定表达蛋白.结果: 在10株转染和经G418反复筛选的CHO细胞系中,有3株(编码为COH-pcDNA3.1-TEF-1δ#3,#6,#14)具有高效稳定表达的TEF-1δ编码蛋白质(Mr约31×103),其余CHO细胞株的TEF-1δ蛋白质表达相对较弱或无表达.在4株转染和经G418反复筛选的COS7细胞系中,4株细胞(编码为COS7-pcCDNA3.1-TEF-1δ #4,#8,#14和#17)均有高效稳定的TEF-1δ编码蛋白表达,相应的无转染组及载体对照组的CHO和COS7细胞均无TEF-1δ蛋白质表达.结论: 这两类TEF-1δ转基因哺乳动物细胞稳定表达系统已成功构建与鉴定,该表达系统的建立对于TEF-1δ这一新基因的生物学功能研究,尤其是镉的致癌作用与致癌机制的研究有重要应用价值.
关键词： TEF-1δ基因 稳定转染 CHO细胞 COS7细胞 Western blot
