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Pf332抗原的结构和抗原表位的初步研究
目的了解恶性疟原虫FCC1/HN株Pf332抗原(Ag332)的初级结构和潜在的抗原表位.方法根据Pf332基因已知序列,合成9对引物用于从恶性疟原虫FCC1/HN株基因组DNA 中扩增Pf332基因片段.将扩增得到的9个Pf332基因片段插入pMD-18T载体后测序.用DNAstar软件将测定的Pf332基因片段序列拼接出成完整的 Pf332基因序列.分别用SAPS、Tmpred、SingalP 和Blastn程序来分析Ag332的初级结构和序列同源性.将与Pf332基因的9595～10083、10339～10767 和10855～11247位碱基对应的R0 、R1和 R2片段分别插入真核表达载体pcDNA3-S.将pcDNA3-S-R0、pcDNA3 -S-R1 和pcDNA3-S-R2分别免疫Balb/c鼠,并通过免疫组化检测表达产物.通过ELISA 和体外疟原虫生长抑制实验来鉴定DNA免疫所诱导的保护性免疫反应.结果扩增到特异的9个Pf332基因片段,并正确插入pMD-18T载体.序列测定和拼接结果显示, 恶性疟原虫FCC1/HN株Pf332基因长16 377bp,编码5 458个氨基酸,相对分子质量约615.28 ku.Ag332包含17个高度简并的富谷氨酸重复序列,抗原中谷氨酸占30.18%.恶性疟原虫FC C1/HN株和3D7株Ag332的氨基酸残基同源性达94.55%.免疫组化检测显示R0、R1和R2在鼠肌肉组织中表达.分别免疫了pcDNA3-S-R0、pcDNA3-S-R1和pcDNA3-S-R2的实验组IgG含量显著大于空白对照组和pcDNA3组(P＜0.05).体外疟原虫生长抑制实验结果表明,pcDNA3-S-R0、pcDNA3-S-R1和pcDNA3-S-R2组的免疫血清在1:5稀释度时对恶性疟原虫的生长有抑制作用.结论 Pf332抗原是一包含很多高度简并的富谷氨酸重复序列的大蛋白,Pf332基因片段R1和R2编码潜在的抗原表位重复序列.
