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RBM5基因表达载体构建、稳定转染A549细胞系的建立及功能的初步研究
目的:通过构建表达载体、建立稳定转染RN结合基序5(RNA binding motif 5,RBM5)的A549细胞系,初步研究RBM5基因过表达对A549细胞增殖以及天冬-谷-丙-组氨酸盒多肽15[DEAH box polypeptide 15,DHX15]表达的影响.方法:应用分段克隆法构建pcDNA3.1 (+)/RBM5真核表达载体;将测序验证后的重组质粒pcDNA3.1(+)/RBM5转染肺腺癌A549细胞并以G418进行筛选,采用Western印迹鉴定RBM5基因过表达阳性细胞,流式细胞仪分别检测经pcDNA3.1 (+)/RBM5稳定转染的A549细胞[pcDNA3.1 (+)/RBM5-A549]及pcDNA3.1(+)空白质粒转染的A549细胞[pcDNA3.1(+)-A549]的周期分布;运用RT-PCR技术分别检测pcDNA3.1 (+)/RBM5-A549和pcDNA3.1 (+)-A549细胞中剪接相关因子DHX15的表达情况.结果:成功构建出pcDNA3.1(+)/RBM5真核表达载体,筛选出RBM5基因稳定转染过表达阳性细胞株;pcDNA3.1 (+)/RBM5-A549较pcDNA3.1 (+)-A549细胞处于G1期细胞比例增大、S期细胞比例减小(均P＜0.01);cDNA3.1 (+)/RBM5-A549较pcDNA3.1 (+)-A549细胞的DHX15表达上调(P＜0.01).结论:成功构建重组质粒pcDNA3.1 (+)/RBM5,并建立了RBM5稳定转染的A549细胞系;初步证实RBM5基因过表达可抑制肺腺癌A549细胞的细胞周期,并使DHX15表达上调.
