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Spag6L基因文献资料
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Spag6L基因真核表达质粒的构建及细胞内的蛋白表达与定位
目的:构建小鼠Spag6L基因真核表达质粒,并研究其在细胞内的表达与定位.方法:以小鼠睾丸cD-NA基因文库为模版,PCR扩增Spag6L基因全长序列,测序正确后亚克隆至pEGFP-N2和pcDNA3真核表达载体中并酶切鉴定,将构建成功的重组表达质粒转染至COS-7与CHO细胞中,Western blot法检测COS-7细胞中SPAG6L蛋白表达,激光共聚焦扫描显微镜观察SPAG6L蛋白在CHO细胞内的定位.结果:重组质粒pEGFP-Spag6L和pcDNA3-Spag6L经双酶切后产生的1.5 kb的目的插入片段,经测序证实与Spag6L基因一致.GFP-SPAG6L融合蛋白分子质量为82 kU,SPAG6L蛋白分子质量为56 kU.SPAG6L蛋白在CHO细胞中主要定位于细胞质,以微管和囊泡表达为主.结论:构建的pEGFP-Spag6L和pcDNA3-Spag6L真核表达质粒成功,为进一步探究Spag6L基因与Spag6基因的关系以及Spag6L基因在精子发生中的功能与作用奠定了基础.
