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ang-2基因文献资料
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血管生成素-2基因沉默载体构建及其对肝癌细胞的作用
目的:构建血管生成素(ang)-2基因沉默载体,并研究其对肝癌hepG2细胞株的作用.方法:根据ang-2基因序列设计shRNA,并与载体pLVX-shRNA连接,转化感受态细胞,提取质粒测序鉴定.将慢病毒shRNA载体及其辅助包装原件载体质粒共转染293T细胞,在HEK293T细胞中标定其病毒滴度.用包装好的慢病毒以及慢病毒阴性对照感染靶细胞hepG2,感染成功后通过Western Blot方法评价干扰载体对靶基因的干扰效果,并采用MTT法检测其对靶细胞增殖率的影响.结果:酶切鉴定和测序结果证实成功构建了ang-2基因沉默载体.包装并浓缩慢病毒,滴度为1×108 TU/ml.将ang-2基因沉默载体感染hepG2细胞,倒置显微镜下可见绿色荧光.West-ern Blotting检测ang-2蛋白表达水平较对照组明显降低(P＜0.05),而对hepG2细胞增殖率无明显影响.结论:成功构建了ang-2基因沉默载体并感染靶细胞hepG2,证实其对目的基因具有很好的沉默效果.
