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MT01对感染状态人成骨样细胞内ALP活性及mRNA表达的影响
目的:通过检测MT01对牙龈卟啉单胞菌感染的人成骨样细胞内特异性成骨相关因子ALP活性及mR-NA表达水平的改变,探讨MT01对感染状态下人成骨样细胞成骨向分化的影响.方法:选取状态良好的MG63细胞接种于6孔板内,2个MT01组加入质量浓度为1 mg/L的MT01,共孵育3h后,相应组加入感染复数为100:1的Pg菌悬液.实验分为:空白对照、MT01、Pg和MT01+ Pg4组,碱性磷酸酶测试盒测定24h后上清液及细胞内ALP活性.Real-time PCR检测2、4、6、8、12、24 h特异性成骨相关因子ALP mRNA的表达.结果:在感染与非感染情况下,MT01均可促进ALP活性,且上调MG63细胞内成骨相关因子ALP mRNA表达,其表达上调呈时间依赖性.结论:MT01可促进感染及非感染状态下MG63内ALP基因表达水平,提高ALP活力.
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MT01对Pg感染的成骨细胞MG63特异性成骨相关因子表达的影响
目的:通过检测MT01对牙周致病菌Pg感染的成骨细胞MG63细胞内特异性成骨相关因子基因表达水平,探讨MT01对感染状态下成骨细胞成骨分化作用的影响.方法:选取生长状态稳定的人成骨样细胞MG63接种于6孔板,分别加入质量浓度1 mg/L的特定序列寡核苷酸MT01和等体积PBS,共孵育3h后,加入感染复数MOI=100∶1的Pg菌悬液(对照组加等体积PBS).即实验分为:MT01+Pg、MT01、Pg和空白对照4组,Real-time PCR检测2、4、6、8、12、24 h特异性成骨相关因子Runx2,SP7 mRNA的表达.结果:在有无Pg感染的状态下,MT01均可上调成骨细胞MG63细胞内成骨相关因子Runx2,SP7 mRNA的表达,但在不同时间点,MT01调控Runx2,SP7 mRNA表达上调的能力存在差异.结论:MT01可以促进牙周致病菌感染下的成骨细胞的成骨向分化.
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氧化应激对人成骨样细胞MG63活性的影响
目的 建立人成骨样细胞氧化应激模型,研究氧化应激对人成骨样细胞形态和增殖活力的影响.方法 用不同浓度黄嘌呤/黄嘌呤氧化酶(xanthine/xanthine oxidase,X/XO)的酶促反应产生的超氧阴离子自由基(O2-˙)刺激人成骨样细胞MG63,建立成骨细胞内氧化应激模型,用X/XO加黄嘌呤氧化酶抑制剂羟嘌呤醇研究其对该氧化应激模型的逆转作用.运用氧化敏感性荧光探针2'7'-二氯荧光黄双乙酸盐结合流式细胞术检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)的生成,用倒置相差显微镜和MTT实验观察研究氧化应激对成骨细胞形态及增殖活力的影响.结果 X/XO处理MG63细胞后,细胞形态发生明显破坏;在相同处理时间下,X/XO浓度越高,细胞内ROS荧光强度值越高,吸光光密度(opitical density,OD)值越低,差异具有统计学意义(P<0.05),且X/XO加羟嘌呤醇联合处理组的细胞内ROS平均荧光强度较相同浓度X/XO单独处理组明显降低(P<0.05).在相同X/XO处理浓度下,随着处理时间的延长,细胞内ROS平均荧光强度逐渐增强,OD值明显降低,120 min时细胞内ROS平均荧光强度比对照组增加了345%.24 h时OD值为相同时间对照组的22.9%.结论 X/XO可导致人成骨样细胞氧化应激损伤,破坏人成骨样细胞的形态,抑制人成骨样细胞的增殖活力.X/XO抑制剂羟嘌呤醇可逆转X/XO引起的人成骨样细胞氧化损伤.
关键词： 氧化应激 人成骨样细胞MG63 活性氧 骨吸收 -
MT01/PEN复合物对人成骨样细胞MG63表达骨保护蛋白和核因子κB受体活化因子配体的影响
目的：???应用聚乙烯亚胺阳离子聚合物（PEN）载体装载寡脱氧核苷酸MT01，制备MT01/PEN复合物，检测该复合物对人成骨样细胞MG63表达骨保护蛋白（OPG）和核因子κB受体活化因子配体（RANKL）的影响。方法?制备3种不同配比的MT01/PEN（质量比分别为1∶2、1∶4、1∶6）复合物，以全硫代化修饰MT01（MT01-s）和未修饰的MT01作阳性对照，分别转染MG63细胞。采用酶联免疫吸附测定法和real-time聚合酶链反应法分别检测培养24、48、72?h时各组上清液及细胞内OPG和RANKL的表达水平。结果???经MT01/PEN复合物转染后，上清液及细胞内OPG表达水平均升高（P<0.05）；多数组中RANKL表达水平降低，而OPG/RANKL比值呈升高趋势（P<0.05）；不同质量配比的MT01/PEN均对MG63细胞的成骨具有影响，其中质量比为1∶6时作用明显。结论???应用PEN作为基因载体装载MT01可增强MT01对MG63细胞的促成骨作用。
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富血小板血浆对人成骨样细胞MG63增殖能力的影响
目的 研究富血小板血浆(PRP)对人成骨样细胞MG63增殖能力的影响,探讨PRP的生物学功能.方法 采集健康志愿者的静脉血,两次离心法制备PRP,氯化钙加人凝血酶激活后离心提取PRP萃取液.碱性磷酸酶(ALP)染色检测不同体积分数PRP(0、1％、2％、3％)对MG63分化活性的影响,碘化丙啶(PI)荧光染色观察PRP作用下MG63细胞形态的变化,免疫细胞化学检测PRP对MG63表达转化生长因子-β(TGF-β)的影响,扫描电子显微镜(SEM)观察PRP对MG63在人工骨材料表面生长情况的影响,CCK-8法检测PRP对MG63增殖活性的影响,流式细胞术(FCM)检测经PRP培养后不同时间MG63的细胞周期,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测PRP作用下MG63中Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ) mRNA的表达量.结果 ALP检测见3％PRP组ALP阳性细胞染色深,并随体积分数的增加染色强度增加,且PRP组细胞均出现不同程度的脱片现象.PI荧光染色见PRP组细胞核荧光染色较对照组增强.免疫细胞化学检测见3％PRP组TGF-β表达量高(P＜0.05).SEM观察:PRP组材料表面MG63密集,生长状态良好.CCK-8法测定细胞增殖活性,显示4.8％PRP组吸光度A450nm值高于对照组(P＜0.05).FCM检测表明:PRP组第2天S期细胞百分比高于对照组(P＜0.05);第10天PRP组G0/G1期细胞百分比高于对照组(P＜0.05)；除第6天外,PRP组G2/M期细胞百分比均高于对照组.RT-PCR结果表明:PRP组MG63的Col-Ⅰ mRNA表达量较对照组明显上调.结论 适宜体积分数的PRP对MG63的增殖、迁移和相关蛋白、基因的表达有促进作用,PRP具有统一、协调细胞生物学行为的作用.
关键词： 富血小板血浆 人成骨样细胞MG63 细胞增殖
