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微小RNA-148a-3p对强直性脊柱炎患者T细胞自噬及炎症应答的影响及其机制
目的 探讨微小RNA(miRNA,miR)-148a-3p对强直性脊柱炎患者T细胞白噬及炎症应答的影响及其作用机制.方法 采用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测强直性脊柱炎(AS)患者T细胞中miR-148a-3p和DNA甲基转移酶1(DNMT1)的表达水平.利用Western blot检测自噬标志分子[微管相关蛋白1轻链3(LC3)、Beclin-1和自噬相关基因5(ATG5)]的蛋白表达量.利用双荧光素酶报告系统、RT-qPCR及Western blot法验证miR-148a-3p与DNMT1的靶向作用关系.结果 与正常对照组比较,AS患者T细胞中miR-148a-3高表达,而DNMT1表达水平较低.miR-148a-3p过表达显著增加了炎性因子白细胞介素(IL)-6、IL-17和IL-23的表达水平(4.23±0.34比1.06±0.15,P=0.000;2.87 ±0.29比1.02±0.17,P=0.000;3.12 ±0.32比1.07±0.21,P=0.000);反之,抑制miR-148a-3p的表达,细胞因子表达水平则明显降低(0.41 ±0.14比0.97±0.13,0.52±0.10比0.95 ±0.14,0.45 ±0.12比0.98 ±0.18;P =0.008).此外,过表达miR-148a-3p明显降低自噬标志基因LC3Ⅱ/LC3 Ⅰ、ATG5和Beclin-1的表达水平(0.44±0.13比1.06±0.16,P=0.003;0.38 ±0.11比1.07 ±0.16,P=0.002;0.42 ±0.12比1.03±0.14,P=0.003);相反,下调miR-148a-3p则增加自噬水平(2.89±0.28比1.03±0.17,P=0.000;3.31 ±0.29比0.98 ±0.18,P =0.000;3.68 ±0.31比1.02 ±0.15,P=0.000).双荧光素酶报告基因检测结果显示,miR-148a-3p与DNMT1存在直接的靶标关系(0.44±0.07比1.00±0.12,P=0.002;1.68±0.17比1.00±0.11,P =0.004);且miR-148a-3p过表达抑制DNMT1的mRNA(0.38 ±0.17比0.98±0.23,P=0.011)和蛋白(0.41 ±0.17比0.97±0.25,P=0.014)表达水平,反之则促进DNMT1的mRNA(3.83±0.29比1.04±0.21,P=0.000)和蛋白(3.46±0.28比1.02±0.20,P=0.000)表达.结论 miR-148a-3p其可以通过靶向调控DNMT1的表达来调节成T细胞自噬及炎症应答.
关键词： 强制性脊柱炎 微小RNA-148a-3p 自噬 炎性因子
