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微小RNA-520e通过调控锌指蛋白367抑制肺癌A549细胞的迁移和侵袭
目的 探讨微小RNA-520e (miR-520e)对肺癌细胞株A549细胞迁移和侵袭的影响及其分子机制.方法 采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测肺癌细胞A549和正常肺上皮细胞BEAS-2B中miR-520e的表达差异,转染miR-520e模拟物(miR-520emimics)获得miR-520e过表达细胞株,迁移实验及Transwell实验检测miR-520e对A549细胞迁移和侵袭的影响.生物信息学预测miR-520e靶向锌指蛋白367(ZNF367)基因,通过双荧光素酶报告体系进行验证.Western blot检测miR-520e过表达对ZNF367蛋白表达的影响,采用小干扰RNA(siRNA)研究ZNF367对A549细胞迁移和侵袭的影响.结果 RT-PCR结果显示,相对于BEAS-2B细胞(1.000±0.135),A549细胞中miR-520e表达量为0.342±0.214(P =0.000).转染miR-520e mimic后,相对空白对照(NC)组(1.000±0.273),mimic组miR-520e过表达(2.617±0.124,P=0.000).划痕培养24 h后,与NC组[(100.000±12.347)％]相比,mimic组细胞迁移率为[(43.727±16.746)％],scramble组细胞迁移率为[(91.722±7.631)％],过表达miR-520e抑制肺癌细胞迁移(P =0.000).侵袭实验结果显示,mimic组发生侵袭的细胞数[(36.458 ±21.301)％]与miR-520e scramble组[(93.783±9.125)％]和NC组[(100.000±15.114)％]比较减少(P=0.000).荧光素酶报告基因结果显示,转染miR-520e mimics抑制荧光素酶的活性(0.374±0.241,P=0.000).RT-PCR和Western blot发现miR-520e mimics下调ZNF367的表达(0.426±0.153,P=0.000;0.368±0.127,P=0.000).进一步实验发现,miR-520e靶向ZNF367基因调控肺癌细胞的迁移和侵袭.结论 miR-520e通过调控ZNF367抑制肺癌A549细胞的迁移和侵袭.
关键词： 微小RNA-520e 锌指蛋白367 肺癌 迁移 侵袭
