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ROS/PARP-1/AIF信号通路在糖皮质激素诱导的MC3T3-E1细胞凋亡过程中的作用研究
目的 通过用地塞米松诱导小鼠胚胎成骨细胞前体细胞(MC3T3-E1)的凋亡,建立激素性股骨头坏死的细胞模型,探讨抗氧化剂(N-乙酰-L-半胱氨酸,NAC)和钙蛋白酶的抑制剂(PD151746)对MC3T3-E1细胞抑制凋亡的作用和可能机制的研究.方法 CCK-8检测NAC和PD151746不同药物浓度对MC3T3-E1细胞增殖的影响,选择合适的药物浓度.细胞分组:正常组(10％ FBS),激素组(地塞米松1×10.6 mol/L),NAC组(NAC1 mmol/L+地塞米松1×10-6 mol/L)和PD151746组(简称PD组,PD 10 μmol/L+地塞米松1×10-6 mol/L),流式细胞仪检测细胞凋亡率和ROS含量,激光扫描共聚焦显微镜检测各组ROS荧光强度和钙离子荧光强度,Westernblot测定细胞蛋白AIF、PARP-1和Cyt-c的表达水平.结果 CCK-8结果显示,NAC和PD151746的实验浓度分别取1 mmol/L和10 μmol/L.流式细胞仪检测凋亡率结果显示,激素组、NAC组和PD组的凋亡率与正常组比较,差异有统计学意义(P＜0.05),激素组与NAC组、PD组比较差异有统计学意义(P＜0.05).流式细胞仪和激光扫描共聚焦显微镜检测各组ROS含量,结果显示激素组荧光强度高,与NAC组和PD组比较明显增高(P＜0.05),其他三组与正常组比较差异也具有统计学意义(P＜0.05).激光扫描共聚焦显微镜检测钙离子荧光强度,与NAC组和PD组比较明显增高(P＜0.05),其他三组与正常组比较差异也具有统计学意义(P＜0.05).Western blot检测各组AIF、PARP-1和Cyt-c的表达水平,激素组、NAC组和PD组的凋亡率与正常组比较,差异有统计学意义(P＜0.05),激素组与NAC组、PD组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 NAC能抑制地塞米松诱导的ROS产生,PD151746能有效抑制钙蛋白酶的活性,抑制PAPR-1/AIF的释放,抑制成骨细胞凋亡,ROS/PARP-1/AIF通路参与了地塞米松诱导MC3T3-E1细胞的凋亡过程.
关键词： 激素性股骨头缺血性坏死 凋亡 信号通路 N-乙酰-L-半胱氨酸 PD151746
