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沉默精氨酸琥珀酸合成酶对SMMC-7721细胞增殖、凋亡的影响
目的:探讨shRNA靶向沉默精氨酸琥珀酸合成酶(ASS1)基因后对人肝癌细胞株SMMC-7721细胞增殖、凋亡的影响.方法:应用RT-PCR及Western blot检测5种肝癌细胞系中ASS1的表达情况;将shRNA-ASS1转染入SMMC-7721细胞(shRNA-ASS1组),同时设空白对照组和阴性对照组,观察转染后细胞的生长变化,运用Western blot鉴定其对ASS1基因的沉默效果;采用CCK-8法检测各组转染3d后的细胞增殖情况;流式细胞术检测各组转染24 h后细胞凋亡的情况.结果:ASSl mRNA和蛋白在Changliver、SMMC-7721、QGY-7703、HepG2和HepG3B细胞中的表达差异有统计学意义(FmRNA=1 129.140,F蛋白=1 114.240,P均＜0.001),ASS1在SMMC-7721和HepG3B肝癌细胞系中呈高表达.CCK-8实验显示,与阴性对照组及空白对照组相比,shRNA-ASS1组细胞增殖率降低(F=7.176,P=0.007).细胞凋亡实验显示,shRNA-ASS1组细胞凋亡率高于阴性对照组和空白对照组(F=88.120,P＜0.001).结论:沉默ASS1基因可抑制SMMC-7721细胞增殖,诱导细胞凋亡.
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精氨酸琥珀酸合成酶作为乳腺癌个体化治疗新靶点的研究
氨基酸代谢在细胞生理学中有着举足轻重的作用,因为它参与了大量的细胞代谢和信号通路.精氨酸琥珀酸合成酶(ASS1)是尿素循环中的关键酶,在ASS1缺乏或表达较低的乳腺癌细胞中精氨酸缺乏,减少或降低精氨酸体内含量可以有效抑制肿瘤进展.实验结果表明,聚乙二醇化精氨酸脱亚胺酶(ADI-PEG20)促进精氨酸转变为瓜氨酸,从而降低精氨酸含量;同时mTOR抑制剂抑制CAD(氨甲酰磷酸合成酶2、天门冬氨酸转移酶和氨甲酰天冬氨酸脱水酶复合酶)的磷酸化,与ASS1竞争底物天冬氨酸,达到抑制乳腺癌细胞增殖生长的效果.提示ASS1可能成为抗癌新靶点.
