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新型生物肽GC31对脂多糖诱导的非特异性角膜炎的抑制作用
背景 人体血栓调节蛋白中筛选的生物肽GC31具有天然抗炎活性,相比传统的眼部抗炎药物具有优势及临床转化价值,但目前对其具体的抗炎价值评估研究较少. 目的 研究GC31对脂多糖(LPS)诱导的非特异性角膜炎的抑制作用及可能机制.方法 按随机数字表法将SPF级8～10周龄雄性Wistar大鼠60只随机分为6个组.用于角膜基质内注射10 μl LPS(2g/L,溶于PBS)的方法诱导大鼠非特异性角膜炎模型,角膜中央出现云雾状混浊为造模成功,然后于GC31低剂量组、GC31高剂量组、地塞米松组大鼠结膜下分别注射125 μg GC31、250 μg GC31和250 μg地塞米松(均溶于25 μlPBS),PBS对照组大鼠以同样方式注射PBS,而空白对照组大鼠不给予任何干预.注射后24 h裂隙灯显微镜下观察大鼠角膜炎症表现,并按照Anand的标准进行炎症评分,然后摘除大鼠眼球,对角膜组织进行组织病理学观察;采用免疫组织化学法检测各组大鼠角膜中核因子-KB(NF-KB) p65的表达;用ELISA法检测各组大鼠角膜组织中白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α (TNF-α)蛋白的变化;采用实时荧光定量PCR(real-time PCR)法检测各组大鼠角膜组织中IL-6 mRNA、TNF-α mRNA的表达量. 结果 空白对照组、PBS对照组、GC31低剂量组、GC31高剂量组和地塞米松组大鼠眼部炎症评分差异有统计学意义(F=301.238,P=0.000),其中GC31高剂量组大鼠角膜炎症评分为1.85±0.36,明显低于模型组的2.90±0.43,差异有统计学意义(t'=-5.144,P=0.000),地塞米松组大鼠角膜炎症评分为1.28±0.36,低于GC31高剂量组,差异有统计学意义(t'=-3.931,P=0.000).角膜组织病理学检查显示,GC31高剂量组和地塞米松组大鼠角膜组织炎性细胞浸润较模型组明显减轻;免疫组织化学法检测显示,GC31低剂量组、GC31高剂量组以及地塞米松组大鼠角膜组织中NF-κB p65阳性细胞较模型组大鼠减少;ELISA法测定表明,模型组大鼠角膜中IL-6及TNF-α蛋白质量浓度均明显升高,其中IL-6升高近3 000倍,而GC31高剂量组角膜中IL-6及TNF-α蛋白质量浓度明显低于模型组,差异均有统计学意义(t=-3.361,P=0.001;t'=-3.151,P=0.002),GC31低剂量组角膜中IL-6与TNF-α蛋白质量浓度低于模型组,差异均有统计学意义(t=-2.626,P=0.009;t'=-2.310,P=0.017),地塞米松组大鼠角膜中IL-6及TNF-α蛋白质量浓度明显低于GC31高剂量组,差异均有统计学意义(t=-3.361,P=0.001;t'=-3.360,P=0.000).此外,实时定量PCR法检测表明各组大鼠IL-6 mRNA及TNF-α mRNA的表达和比较趋势与其蛋白表达相同,差异均有统计学意义(P＜0.01). 结论 活性生物肽GC31对LPS诱导的非特异性角膜炎具有抑制作用,250μg GC31抑制炎症反应的作用明显强于125 μg GC31,其作用机制主要是下调组织中炎性因子的表达.
