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γ泌肽酶抑制剂文献资料
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γ泌肽酶抑制剂对胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞Notch信号通路的影响
目的 探讨γ泌肽酶抑制剂在肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)与肺成纤维细胞(LF)共培养胎鼠模型中对Notch信号分子表达的影响.方法 应用Millipore插入式培养皿和Costar 6孔板构建AEC Ⅱ/LF共培养胎鼠模型.应用免疫组织化学法分别检测其细胞表面标志物表面活性蛋白C(SP-C)鉴定AEC Ⅱ、LF.锥虫蓝拒染实验检测AECⅡ、LF活力后将γ泌肽酶抑制剂加入低必需培养基(MEM)(终质量浓度为0.2 g/L)作为实验组,未加入者为对照组.应用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)、蛋白质印迹法(Western blot)在基因和蛋白水平检测二组在培养24、48、72、96 h AECⅡNotch受体、转录调节因子DNA结合蛋白(CBF-1)及转录因子分裂增强子(HES-1)表达.采用SPSS 11.5软件进行组间t检验和组内单因素方差分析.结果 原代培养AECⅡ纯度(94.7 ±1.9)%,细胞活力为(96.2 ±2.5)%;LF纯度(97.2±1.4)%,细胞活力为(98.5 ±2.6)%.实验组CBF-1 mRNA及CBF-1蛋白在24、48、72、96 h与对照组比较均无显著变化(Pa＞0.05),实验组Notchl mRNA在24、48、96 h,Notch3 mRNA在48、72、96 h较对照组均显著降低(Pa＜0.05),HES-1 mRNA及蛋白在各时间点均显著降低(Pa＜0.05,0.01).结论 γ泌肽酶抑制剂可部分阻断胎鼠AEC Ⅱ发育中的Notch信号通路传导,其机制可能通过非CBF-1依赖途径.
