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13-顺式维甲酸体外诱导3种神经母细胞瘤细胞株分化研究
目的 探讨13-顺式维甲酸(13-cis RA)体外对3种人神经母细胞瘤(NB)细胞株生长的影响及其作用机制.方法 常规培养SH-SY5Y、SK-N-SH和SK-N-BE2细胞株,荧光原位杂交技术(FISH)检测3种细胞MYCN基因扩增情况.不同浓度13-cis RA作用后,采用相差显微镜观察细胞形态变化,酶联免疫吸附法测定细胞培养液神经元特异性烯醇化酶(NSE),细胞增殖毒性检测法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果 13-cis RA作用后,3种细胞均伸出多个轴突树突状突起,呈极性化改变,出现细胞分化.FISH检测结果显示,SK-N-BE2细胞为MYCN扩增阳性,13-cis RA作用后MYCN仍扩增阳性,另2种细胞株未见扩增.3种细胞经不同浓度13-cis RA作用后NSE水平随药物作用时间延长而升高,其中SK-N-BE2细胞NSE水平显著升高,差异均有统计学意义(F =27.00,P＜0.000 1).13-cis RA作用48 h内均促进细胞增殖,随后转为抑制细胞生长.SH-SY5Y细胞经10 μmol/L 13-cis RA作用96 h及120 h显著增加细胞凋亡(F=16.21,P=0.011;F=16.04,P=0.016);SK-N-SH细胞经1μmol/L及10 μmol/L 13-cis RA作用48 h,细胞凋亡均显著增加(F=15.05,P=0.012;F=31.18,P=0.005);SK-N-BE2细胞经不同浓度13-cis RA(1 μmoL/L、5μmol/L、10 μmol/L)作用120 h细胞凋亡均显著增加(F=9.05,P=0.030;F=11.38,P=0.028;F=7.88,P=O.041).结论 13-cis RA体外能显著诱导NB细胞分化,作用48 h内促进细胞增殖,随后表现为抑制细胞生长,促进细胞凋亡. 13-cis RA对MYCN扩增阳性的细胞在DNA检测水平无改善,提示可能需要联合用药.
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高效液相色谱法同时检测人血清中全反式及13-顺式维甲酸浓度
目的:建立高效液相色谱方法同时检测人血清中全反式及13-顺式维甲酸浓度.方法:色谱柱:μBondapak C18(3.9 mm×300 mm),流动相:甲醇-醋酸铵缓冲液(85:15),流速:0.8 mL·min-1,紫外检测波长:340 nm,柱温:22 ℃,血清样品经乙醚2次提取,按内标法定量,内标物选用对二甲氨基苯甲醛.结果:全反式及13-顺式维甲酸的线性范围分别在0.8～1 120 μg·L-1和0.82～1 312 μg·L-1,低检测浓度均为0.6 μg.L-1.全反式维甲酸测定的平均回收率为98.86%～105.2%,日内、日间精密度RSD为0.84%～5.5%,13-顺式维甲酸测定的平均回收率为101.6%～101.8%,日内、日间精密度RSD为1.4%～5.7%.结论:本方法灵敏、准确,样品处理简便易行,适用于全反式维甲酸的临床药动学研究.
