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耐药肝癌细胞p62表达与顺铂敏感性的关系
目的 观察顺铂耐药的肝癌细胞中p62的表达情况,及p62基因沉默后耐药肝癌细胞对顺铂敏感性的变化.方法 培养肝癌亲本细胞HepG2、Huh7,通过浓度梯度法建立顺铂耐药细胞模型,采用Western blotting法检测亲本HepG2、Huh7细胞和耐药HepG2、Huh7细胞中的p62蛋白.将耐药HepG2、Huh7细胞分为沉默组和耐药组,分别转染p62 siRNA和siRNA Negative Control.在转染48 h后的0、1、2、3、4、5 d测算沉默组和耐药组细胞存活率.转染后48 h进行Hochest 33258染色观察沉默组和耐药组细胞凋亡核形态、计数凋亡细胞,采用Annexin V-FITC/PI流式细胞术测算细胞凋亡率.转染后48 h采用Western blotting法检测沉默组与耐药组细胞中的核因子红细胞前体2相关因子2(Nrf2),RT-PCR法检测Nrf2蛋白下游的谷氨酸半胱氨酸合成酶(GCL)、谷胱甘肽S转移酶(GST)、NADP(H)醌氧化还原酶(NQO1)、血红素氧化酶1(HO-1)、多药耐药蛋白(Mrp)基因.结果 耐药的HepG2、Huh7细胞中p62蛋白相对表达量分别高于亲本HepG2、Huh7细胞(P均<0.05).转染48 h后的0、1、2、3、4、5 d沉默组HepG2、Huh7细胞存活率低于耐药组(P均<0.05).沉默组凋亡细胞数及凋亡率均高于耐药组(P均<0.05).沉默组细胞中Nrf2蛋白及NQO1、GCL、GST、HO-1、Mrp mRNA相对表达量均低于耐药组(P均<0.05).结论 顺铂耐药的肝癌细胞中p62蛋白表达上调;p62基因沉默后耐药肝癌细胞对顺铂的敏感性增强,其机制可能与Nrf2及其下游基因表达下调有关.
