您当前的位置：
首页 > 文献资料
所属专业：
人FLT3配体文献资料
-
人重组FLT3配体在昆虫细胞中的表达、纯化和鉴定
目的 人FLT3配体(hFLT3L)是一种能有效地刺激早期造血的细胞因子,本研究利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统在昆虫细胞中分泌表达hFLT3L具有活性的胞外区.方法 从前期构建的pGH-rhFLT3L中扩增目的基因,构建到pEASY-blunt,再将目的基因连接到pFastBacTM1,pFastBacTM1-rhFLT3L转化DH10Bac发生位点特异性转座,通过抗生素和蓝白斑筛选阳性克隆.PCR鉴定Bacmid-rhFLT3L重组质粒并转染Sf9昆虫细胞,利用病毒感染High Five细胞进行蛋白表达,采用Ni+亲和层析和凝胶过滤层析分离纯化.结果 纯化样品质谱鉴定为hFLT3L胞外区,分子量为18.0~19.2kDa,生物学活性测定估算rhFLT3L表达量约56mg·L-1,纯化样品活性为3.1×106RU·mg-1,与R&D标准品相当,为其科研和临床应用奠定了坚实的基础.
