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免疫磁珠荧光量子点技术检测结核分枝杆菌
目的 筛选结核分枝杆菌(MTB)免疫磁珠荧光量子点检测方法的佳配体组合.方法 将本室筛选获得的MTB结合肽H8和商业化抗MTB多克隆抗体(Pab)与纳米磁珠偶联,多肽H8、商业化抗MTB单克隆抗体(Mab)和抗热休克蛋白65单克隆抗体(Mabc)与荧光量子点偶联,分别获得2种免疫磁珠和三种功能化荧光量子点,两两组合用于MTB检测,通过显微镜下观察荧光信号以及激光诱导荧光仪测量荧光值,判断不同配体组合与MTB的亲和性及特异性,获得佳组合及其检测下限.结果 偶联Mabc的荧光量子点与免疫磁珠MNP-Pab组合检测MTB结果为阴性,其余5组均为阳性.测量荧光值,检测效果较好的两组组合分别是MNP-Pab+QD-H8和MNP-H8+QD-H8,阳性荧光值与阴性对照组比值分别是4.394和3.956,检测下限均是102条菌/mL.6组组合与12种非结核分枝杆菌(NTM)的亲和性各异,而与3种非分枝杆菌均不结合.结论 MNP-Pab+QD-H8和MNP-H8+QD-H8 两组检测效果较好,与MTB亲和性较高,特异性较好,可作为MTB免疫磁珠荧光量子点检测技术的佳配体组合.
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一种新型结核分枝杆菌检测方法的研究
目的 探讨利用荧光量子点(QDs)开发新一代结核分枝杆菌的检测方法.方法 采用特异性多克隆抗体偶联到磁珠上用于结核杆菌的分离和富集,然后用标记QDs的链霉亲和素检测结合生物素标记的肝素血凝素(HBHA)单克隆抗体的结核杆菌.采用牛结核分枝杆菌和结核分枝杆菌作为阳性样品,以大肠杆菌和沙门氏菌作为阴性对照,以评估该方法的可行性.结果 用抗酸染色能检测到磁珠分离和富集的结核杆菌,直接观察没有发现阴性对照有荧光,但阳性对照可以观察到荧光.直接观察法的检测限为104细菌/mL.当采用荧光光度计检测样品时,其检测限可以达到103细菌/mL.结论 该方法能适用于包括结核分枝杆菌病原体的检测,是一种具有前景的病原体的检测方法.
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叶酸偶联荧光量子点脂质体纳米探针的合成
目的:制备荧光量子点和叶酸偶联荧光量子点脂质体纳米探针,初步确证探针的性质,为相关肿瘤的早期荧光诊断奠定基础。方法:采用水相合成法合成3-巯基丙酸修饰的水溶性CdTe量子点,将脂质材料与叶酸分子连接,通过薄膜水化法制备得到叶酸偶联的荧光量子点脂质体纳米探针,利用紫外可见吸收光谱( UV-vis)、红外光谱( IR)、分子荧光光谱法( MFS)、核磁共振( NMR)等方法确证荧光量子点、叶酸偶联脂质材料、叶酸偶联荧光量子点脂质体纳米探针性质;于-4℃冰箱内贮存6个月,观察叶酸偶联荧光量子点脂质体纳米探针的稳定性。结果:荧光量子点的荧光性质可随着反应时间的变化而变化,红外光谱、紫外可见吸收光谱、核磁共振氢谱证实叶酸偶联脂质材料合成成功;合成得到的叶酸偶联荧光量子点脂质体纳米探针平均粒径为462.9 nm,zeta电位为-0.0722 mV,在520 nm处有大荧光发射峰;放置6个月后,荧光性质未见明显变化。结论:叶酸偶联脂质体成功将CdTe量子点包裹,制备得到荧光强度高、性质稳定的纳米探针。