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应用碱性成纤维细胞生长因子基因治疗促进大鼠早期断蒂皮瓣的成活
目的 探讨腺病毒介导的碱性成纤维细胞生长因子基因(Ad-bFGF)对大鼠随意皮瓣早期断蒂的影响.方法 SD♂大鼠,普通级,随机分成3组: Ad-bFGF目的 组、Ad-GFP对照组、PBS对照组,每组10只.于大鼠背部设计2 cm×6 cm随意皮瓣,蒂位于髂脊水平.术后4 d断蒂,断蒂后7 d观测皮瓣成活面积,检测bFGF表达情况,计算血管密度.结果 目的 组皮瓣的成活率、血管密度和染色深度均较两对照组有显著差异(P＜0.05).结论 应用Ad-bFGF基因治疗能够促进大鼠随意皮瓣早期断蒂.
关键词： 成纤维细胞生长因子2/遗传学 基因疗法 外科皮瓣 -
人碱性成纤维生长因子重组质粒的构建
目的 通过基因体外拼装(PBGA)获得带有BamHI和Pst Ⅰ内切酶位点的重组人碱性成纤维生长因子(rhbFGF)cDNA,并利用TA克隆技术构建含rhbFGF基因片段的重组质粒.方法 (1)根据己知的hbFGF氨基酸序列并结合乳酸链球菌蛋白表达密码子来设计适于乳链菌内表达的hbFGF基因序列,分别在5′和3′端设计BamHI和Pst Ⅰ酶切位点,通过DNASTAR 6.0将上述目的基因序列设计成22个可以相互重叠的寡核苷酸片段,bFGFI -bFGF22.(2)采用基因拼装技术,通过PCR反应,拼接1～ 22段寡核苷酸片段,合成带有设定内切酶位点的rhbFGFcDNA.(3)构建rhbFGF TA克隆载体.纯化上步拼接rhbFGF基因片段,产物与PMD1 8-T VECTOR进行连接反应.连接产物转化于E.coli TOP10感受态细胞,涂板、筛选、培养后提质粒,酶切鉴定并测序.结果 (1)体外拼装带有BamHI和Pst Ⅰ内切酶酶切位点的rhbFGFcDNA经2％琼脂糖电泳验证；(2)构建了载体hrbFGF-PMD18,经酶切鉴定和测序证实碱基序列完全正确.结论 利用PBGA和TA克隆技术可成功构建rhbFGF-PM D18重组质粒.
关键词： 重组蛋白质类/遗传学 成纤维细胞生长因子2/遗传学 质粒 遗传载体
