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5型腺相关病毒文献资料
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hIL-2与ZsGreen双基因共表达腺相关病毒的包装及鉴定
[目的]包装并鉴定带有人白介素2（hIL-2）及ZsGreen的双基因共表达的重组5型腺相关病毒（recombinant adeno-associated virus 5, rAAV5），为今后利用5型重组腺相关病毒载体进行胰腺癌基因治疗提供研究基础。[方法]以5型腺相关病毒包装系统（helper-free system）为模版，PCR法扩增pLVX-IRES-ZsGreen和PES-IL-2模板上的IRES-ZsGreen和IL-2基因，利用酶切位点插入重组腺相关病毒骨架质粒，获得重组质粒pAAV-hIL-2-IRES-ZsGreen。经三质粒共转染AAV293细胞包装重组腺相关病毒rAAV5-hIL-2-IRES-ZsGreen。荧光显微镜下检测病毒包装效率，超速离心纯化、浓缩重组病毒，qPCR测定病毒的滴度。重组病毒转导细胞经荧光显微镜检测、外源基因经PCR检测证实病毒包装结果。[结果]5型重组腺相关病毒骨架质粒pAAV-IL-2-IRES-ZsGreen经双酶切和测序鉴定，确定其序列正确。荧光显微镜下观察三质粒共转染AAV293细胞72h后，病毒包装效率达90%以上。5型重组病毒感染HEK 293细胞48h有荧光出现，重组病毒基因组成功扩增出外源基因IL-2，证明有感染力的重组病毒包装成功。[结论]成功包装带有hIL-2及ZsGreen标记的双基因共表达重组腺相关病毒，滴度达到2.62×1012。
