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PNP/fludarabine自杀基因系统对人肝癌细胞HepG2体外杀伤效应
[目的]研究嘌呤核苷酸磷酸化酶(purine nucleoside phosphorylase,PNP)/氟拉达滨(fludarabine)系统对人肝癌细胞HepG2体外杀伤效应.[方法]通过基因克隆技术将E.coli K12菌株来源的PNP基因通过8个甘氨酸的linker克隆至pEGFP-N1载体,在LipofectAMINE2000介导下,转染人肝癌细胞株HepG2,同时进行G418筛选,直至出现抗性克隆,扩大培养,命名为HepG2/PNP.通过PCR、RT-PCR、Northern blot鉴定PNP基因的表达;采用MTT和Annexin V-FITC观察不同浓度的fludarabine对已转染的HepG2、不同比例转染和非转染混合细胞的杀伤作用.[结果]RT-PCR和Northern印迹证明转染的PNP基因能在HepG2和HepG2/PNP细胞中表达;低浓度fludarabine对转染了PNP基因的HepG2细胞具有显著的细胞毒效应;Anniex Ⅴ凋亡实验结果表明PNP/flndarabine自杀基因系统对HepG2细胞具有显著的诱导凋亡作用;旁观者效应显示当10%～20%的HepG2/PNP细胞与80%～90%HepG2细胞混合在fludarabine浓度为1.0μg/ml时,可出现明显的旁观者效应.[结论]PNP/flu-darabine自杀基因系统在fludarabine浓度为0.5μg/ml～1.0μg/ml时对人原发性肝癌细胞HepG2具有明显的杀伤作用和旁观者效应.
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氟达拉滨联合中剂量阿糖胞苷治疗复发难治性急性髓系白血病效果观察
目的 比较氟达拉滨(FLud)联合中剂量阿糖胞苷(Ara-C)(改良FLAG方案)与CAG 预激方案治疗复发难治性急性髓系白血病(AML)的疗效及患者不良反应.方法 49例复发难治性AML 患者,随机分为两种治疗方案组,改良FLAG治疗方案组:粒细胞集落刺激因子(G-CSF)每天200 μg/m2,第0天至第5天,Flud每天30 mg/m2,第1天至第5天;Ara-C每天1 g/m2,第1天至第5天.CAG预激治疗方案为:G-CSF每天200 μg/m2,第1天至第14天,阿柔比星20 mg/d,第1天至第4天,Ara-C 10 mg/m2,1次/12h,第1天至第14天.结果 改良FLAG组完全缓解(CR)率43 ％(10/23),部分缓解(PR)率21％(5/23),有效率64 ％;CAG预激组CR率23％(6/26),PR率19％(5/26),有效率42％,两组间比较差异有统计学意义(P＜0.05);主要不良反应为骨髓抑制、感染,改良FLAG组感染发生率70％(16/23),CAG组感染发生率为54％(14/26),两组间比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 改良FLAG方案可有效治疗复发难治性AML患者,加强感染防控措施,缩短骨髓抑制时间.CAG方案不良反应小,可分层个体化治疗复发难治性AML患者.
