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泛素连接酶E3:真核表达载体文献资料
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人环指蛋白11真核表达载体的构建及表达
目的 构建含有标签蛋白的人环指蛋白11( ring finger protein 11,RNF11)的真核表达载体,并观测其在293T细胞中的表达. 方法 使用MEGA5.0等生物学软件构建人RNF11的分子进化树；应用RT-PCR从4种人胃癌细胞系中检测到该基因的表达,并将其克隆到pEASY-Blunt载体中,酶切测序鉴定正确后,再将其连接到真核表达载体pCMV-HA中,酶切鉴定正确后转染293T细胞,Western-blotting测其表达. 结果 重组的携带有RNF11的真核表达载体酶切鉴定后显示载体及片段的大小正确,将该真核表达载体转染293T细胞后使用Western-blotting检测到了融合蛋白的表达. 结论 携带有标签蛋白的人RNF11基因的真核表达载体pCMV-HA-RNF11克隆及表达成功,为进一步研究其与其它蛋白质的相互作用奠定了基础.
关键词： 环指蛋白 泛素连接酶E3:真核表达载体 胃癌
