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SmaⅠ持续连接技术文献资料
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核酶体外切割肝癌多药耐药基因的研究
目的利用核酶技术切割肿瘤多药耐药基因(MDR1),逆转肿瘤抗药性.方法针对人类MDR1mRNA第VⅡ外显子附近第179及196密码子的GUC序列,按照"锤头结构"模型设计、合成了两个核酶179MDR1 Ribozyme(179RZ)和196MDR1 Ribozyme(196RZ),并定向克隆入载体PGEM-3Zf(+)中.从肝癌多药耐药细胞株SMMC-7721/DOX中提取MDR1mRNA,RT-PCR法扩增出约269bp大小的特异性cDNA片段,采用SmaRT法克隆入载体PGEM-3Zf(+)中.在体外转录成RNA.结果通过测序证实重组质粒插入片断正确,在生理条件下,两个核酶均能定点切割MDR1mRNA成两段特定大小的片段.核酶的切割效率与作用时间、核酶与底物的比率、Mg2+浓度有关,196RZ的切割活性高于179RZ.结论核酶技术逆转肿瘤抗药性具有现实可能性.
关键词： 多药耐药基因 核酶 基因克隆 逆转录-聚合酶链反应 SmaⅠ持续连接技术
