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LRIG1体外对U251细胞的放疗增敏作用
目的 研究亮氨酸重复序列免疫球蛋白样蛋白1(LRIG1)体外对U251细胞的放疗增敏作用及其机制.方法 将pLenti-TO-LRIG1-V5及空质粒pLenti-TO-V5采用慢病毒法感染U251细胞,筛选出稳定感染细胞株后给予2 Gy辐照.采用CCK-8法检测细胞增殖能力,平板克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,Transwell法检测U251细胞侵袭能力,流式细胞术检测细胞凋亡情况,γ-H2AX免疫荧光法检测双链DNA损伤情况,Western blot检测相关蛋白的表达.结果 U251-LRIG1组细胞接受辐照后较U251-Vector组细胞增殖、侵袭、克隆形成能力降低,细胞凋亡增加,γ-H2AX荧光染色焦点数增多(P＜0.05).U251细胞感染LRIG1慢病毒后,EGFR、N-Cadherin、Vimentin、DNA-PKcs、Beclin-1和LC3Ⅱ/I表达水平下降,E-Cadherin表达水平增高(P＜0.05).结论 在U251细胞中过表达LRIG1可以通过下调EGFR逆转上皮间充质转化,抑制DNA-PKcs及细胞自噬等多种途径抑制U251细胞的恶性生物学行为,增加放疗敏感性.
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LRIG1基因对胶质瘤SHG44的放疗增敏作用
目的 研究亮氨酸重复序列免疫球蛋白样蛋白1(LRIG1)对人脑胶质瘤细胞系44细胞(SHG44)的放疗增敏作用.方法 采用分子克隆技术,将构建的重组质粒pEGFP-C1-LRIG1转染SHG44,并稳定表达后在荧光显微镜下观察;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术研究放射照射后SHG44中目的基因LRIG1和表皮生长因子受体(EGFR)的信使核糖核酸(mRNA)表达情况;免疫组织化学法分析照射后SHG44中LRIG1和EGFR的蛋白表达差异;采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法分析干预后SHG44的细胞增殖能力;细胞侵袭实验(Transwell)分析干预后SHG44的肿瘤侵袭能力.结果 重组质粒pEGFP-C1-LRIG1转染SHG44细胞可稳定表达LRIG1;SHG44+ pEGFP-C1-LRIG1细胞相对于SHG44、SHG44+ pEGFP-C1细胞,LRIG1与EGFR基因的mRNA和蛋白的表达水平有显著差异(P＜0.01);且SHG44+ pEGFP-C1-LRIG1细胞的细胞活性及侵袭能力较SHG44、SHG44+ pEGFP-C1细胞明显下降(P＜0.01).结论 在胶质瘤SHG44细胞中过表达LRIG1基因可通过下调EGFR表达,抑制SHG44细胞的恶性生物学行为,增加放疗敏感性.
