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重组人血清白蛋白第3结构域-Nartograstim融合蛋白在毕赤酵母中的表达及初步活性研究
将人血清白蛋白第3结构域(3DHSA)与粒细胞集落刺激因子突变体(Nartograstim)融合基因克隆至载体pPICzαA,置于醇氧化酶启动子(AOX)和α交配因子信号肽作用下构建分泌表达质粒,电击转化入毕赤酵母GS115.SDS-PAGE结果显示3DHSA-Nartograstim相对分子质量约为42 kD,Western blot证实其同时具有HSA和G-CSF的抗原性.建立融合蛋白表达的条件为:BMMY培养基pH6.0、1.5％甲醇、诱导84 h,灰度扫描发现该条件下融合蛋白的纯度为79％.依次采用亲和色谱和疏水色谱纯化得到纯度高于90％的融合蛋白,终产量为86 mg/L.采用MTT法检测融合蛋白对NFS-60细胞株的促增殖能力,结果显示,3DHSA-Nartograstim具有剂量依赖性促进NFS-60细胞增殖的作用.本研究为3DHSA-Nartograstim的进一步研究奠定了基础.
