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携带Egr-1基因调控序列的TK基因的腺病毒载体的构建
目的:构建以GFP做标志基因的放射敏感基因Egr-1调控单纯疱疹病毒胸苷激酶基因(herps simplex virus thymidine kinase,TK)的腺病毒载体.方法:以PCl-neo-Egr-1-TK(pET)为模板扩增Egr-1,插入到pAdTrack的XbaI和XhoI位点,构建重组质粒pAdTrack/Egr-1;与pET酶切获得TKcDNA相连,构成pAdTrack/Egr-1-TK;用PmeI酶切后与pAdEasy-1混合,应用细菌内同源重组法获得重组表达质粒pAdEgr-1-TK.结果:重组表达质粒pAdEgr-1-TK的酶切鉴定符合预期结果,感染肿瘤细胞可见绿色荧光表达.结论:通过细菌内同源重组成功构建含GFP做标志基因的pAdEgr-1-TK重组表达质粒,为研究Egr-1调控自杀基因及对肿瘤细胞进行灭活打下了基础.
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端粒酶启动子调控tk基因靶向性杀伤鼻咽癌细胞的实验研究
目的 探讨端粒酶催化亚单位启动子/胸腺嘧啶脱氧核苷激酶(hTERTp/tk)基因特异载体在体外靶向性杀伤鼻咽癌细胞的效应.方法 通过细胞转染将hTERTp/tk转染鼻咽癌细胞株中,采用RT-PCR及MTT法检测hTERTp/tk/pGL3体外特异性杀伤鼻咽癌细胞的效应及其tk基因、端粒酶表达.结果 转染hTERTp/tk/pGL3后可见tk基因表达,端粒酶及其hTERT表达较对照组下降.hTERTp/tk/pGL3能特异性杀伤鼻咽癌HNE1细胞,而对正常成纤维细胞无杀伤作用,hTERTp/tk/pGL3杀伤细胞的效应比阳性对照CMV/tk/pGL3的无选择性杀细胞作用略低.结论 hTERTp/tk基因特异表达系统具有靶向性杀伤鼻咽癌细胞的作用及抑制肿瘤细胞端粒酶活性.
