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PHBV 纳米纤维对大鼠骨髓间充质干细胞向神经干细胞分化的形态学影响
目的:探究聚羟基丁酸戊酸共聚酯( PHBV)纳米材料对大鼠间充质细胞向神经干细胞分化的影响,为PHBV纳米材料与骨髓间充质干细胞( BMSCs)联合移植治疗脊髓损伤提供新的依据。方法:采用贴壁分离培养的方法分离纯化大鼠BMSC,传至3~4代后接种至PHBV纳米纤维膜(定向与非定向)上,以接种至玻片上为对照组,倒置显微镜下观察对照组细胞形态,待细胞与PHBV纳米纤维膜融合(24 h )后,以维甲酸( RA)作为增殖及分化诱导因子对BMSCs进行增殖培养、分化诱导,1周后,实验组采用4%多聚甲醛固定,应用电镜观察细胞形态,用Nestin抗体免疫细胞化学染色鉴定神经干细胞。结果:BMSCs与PHBV纳米纤维膜有很好的相容性,加入RA诱导剂72 h 后细胞形态开始变化,胞体开始回缩,突起逐渐伸出。电镜观察下定向PHBV组的神经元样细胞被显著拉长,并且细胞沿定向纤维的方向伸展,非定向PHBV组与对照组的神经细胞则无明显的拉长状态。免疫荧光染色验证均有Nestin阳性细胞表达。结论:定向纳米纤维通过引导细胞骨架延伸从而对细胞形貌产生显著影响。与非定向纳米纤维相比,神经元样细胞在定向纳米纤维表面被显著拉长。因此,我们认为定向纳米纤维支架可能在神经组织工程中更有优势。
关键词: 骨髓间充质干细胞 聚羟基丁酸戊酸共聚酯纳米材料 神经干细胞 大鼠