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MicroRNA195文献资料
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MicroRNA-195与Smad7靶向关系的研究
目的：构建含有Smad7基因3′-UTR区的荧光素酶报告基因载体，利用双荧光素酶报告基因验证MicroR-NA195与其潜在靶基因Smad7的靶向关系。方法：PCR扩增出Smad7基因3′-UTR区片段，以此构建含3′-UTR的荧光素酶报告基因载体（wild type，WT）；将miRNA-195与荧光素酶报告重组子共转染至293T细胞中，双荧光素酶报告基因系统检测荧光素酶活性；构建含Smad7基因3′-UTR突变体（mutant，Mut）的荧光素酶报告基因质粒，检测荧光素酶活性变化。结果：测序结果表明，含有Smad7基因3′-UTR区的荧光素酶报告基因载体构建正确；荧光素酶活性实验表明，与对照组相比，miRNA-195可使含Smad7基因3′-UTR区的荧光素酶报告重组子的荧光素酶活性降低40％左右；而定点突变Smad7基因3′-UTR的荧光素酶报告重组子荧光活性未有明显变化。结论：成功构建了Smad7基因3′-UTR区的荧光素酶报告基因载体，而miRNA-195可以直接作用于Smad7基因3′-UTR区，抑制其荧光素酶活性。
关键词： MicroRNA195 Smad7基因 荧光素酶报告基因 3′-UTR
