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高效液相色谱蒸发光散射检测法测定聚乙二醇干扰素α-2a注射液中游离聚乙二醇的含量
建立聚乙二醇干扰素α-2a注射液中游离聚乙二醇含量的HPLC测定方法.以XBridge BEH 300 C4(4.6 mm×15.0 cm,3.5μm)色谱柱为固定相,以水-乙腈为流动相,梯度洗脱,流速1.0 mL/min,蒸发光散射检测器检测.游离聚乙二醇与聚乙二醇干扰素α-2a及其它辅料成分得到很好分离,聚乙二醇在20~100 μg/mL范围内,进样量的对数值与峰面积的对数值之间有良好的线性关系(r =0.999),检测限和定量限分别为0.3 μg和0.5 μg,平均回收率为102.2% (RSD=2.1%).结果表明,所建立的含量测定方法简便、快速、准确,可用于聚乙二醇干扰素α-2a注射液中游离聚乙二醇的含量测定.
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聚乙二醇化重组人干扰素β-1a注射液中游离聚乙二醇残留量的测定
目的 对聚乙二醇化重组人干扰素β-1a(PEG-rhIFN-β-1a)注射液中的残留聚乙二醇丁醛(PEG)进行方法学研究.方法 采用Phenomenex Jupiter C4色谱柱,流动相:A相,0.1%三氟乙酸-水溶液;B相,0.1%三氟乙酸-乙腈溶液,梯度洗脱;流速:1.0 mL·min-1,柱温为25℃,蒸发光检测器,漂移管温度为113.0℃,载气流速为3.1L·min-1.结果 PEG在0.6~2.0 μg·mL-1内线性良好,相关系数为0.998 4,检出限为0.20 μg,定量限为0.40 μg,精密度、稳定性和重复性试验的RSD均<2.0%,平均回收率为96%~100%.结论 运用该方法对PEG-rhIFN-β-1a注射液中游离PEG残留量测定,残留量<1.0%.
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聚乙二醇(PEG)化尿酸氧化酶中游离PEG的含量测定
目的:比较并建立PEG化尿酸氧化酶中游离PEG的测定方法.方法:采用反相高效液相色谱-蒸发光散射检测器(ELSD)联用法和SDS-PAGE碘染的方法.RP-HPLC法的色谱柱为C4柱(4.6mm×250mm,5μm);流动相A为0.1%(v/v)的三氟乙酸-水,流动相B为0.1%(v/v)的三氟乙酸-乙腈,梯度洗脱;流速为1.0 mL·min-1;柱温30℃;SDS-PAGE碘染采用氯化钡固定,碘-碘化钾染色.结果:RP-HPLC法中,PEG的检测灵敏度为0.2μg,PEG在1~6μg范围内呈良好的二项式回归关系(R2=0.9993).低、中、高3个浓度的加样回收率分别为96.2%、97.4%、96.8%.SDS-PAGE碘染法灵敏度为0.1 μg.结论:建立的高效液相色谱-蒸发光散射检测器联用法与SDS-PAGE碘染法均可对游离PEG进行测定.前者测定结果准确,重复性好,可用于PEG的精确定量分析,后者操作简单,不需要特殊仪器,但只可用于限度检查.
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荧光胺衍生化法测定3种聚乙二醇化重组人生长激素的平均修饰率
目的:通过对游离氨基进行荧光胺衍生化,测定3种不同结构聚乙二醇化重组人生长激素(PEG-rhGH)的平均修饰率.方法:采用基质辅助激光解吸附飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)测定PEG-rhGH的相对分子质量,求得理论平均修饰率.通过激发波长与发射波长的选取、正交试验、游离PEG干扰试验、反应稳定性考察等方法学考察,建立荧光胺衍生法测定PEG-rhGH平均修饰率.结果:从质谱法可知PEG-rhGH的理论修饰度为10%.方法学考察结果显示,激发波长与发射波长分别为390 nm与480 nm,溶液pH对试验结果的影响大,低浓度的PEG对试验结果无干扰,在反应开始8 min之内荧光强度稳定.荧光胺法测得3种不同结构PEG-rhGH的修饰度分别为8.8%、9.8%及9.5%,与理论值接近.结论:荧光胺法可作为测定PEG-rhGH平均修饰率的方法,3种PEG化重组人生长激素的平均修饰率为10%.