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TAT-nNOS1-133文献资料
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细胞穿透肽TAT融合小鼠nNOS1-133重组蛋白的表达纯化及药效学研究
目的:表达、纯化有活性的TAT-nNOS1-133重组蛋白,并初步验证其神经保护作用;为开发新神经保护药物提供理论基础.方法:通过PCR、酶切和酶连的方法构建pET28a-TAT-nNOS1-133重组质粒,并转化入大肠杆菌中表达.表达产物经洗涤、复性、阴离子交换柱(DEAE-52)、超滤纯化并除盐.通过FITC标记目的蛋白评价其能否进入细胞,并通过检测细胞凋亡评价TAT-nNOS1-133对谷氨酸诱导的兴奋性毒性的保护作用.结果:获得了较高纯度的TAT-nNOS1-133重组蛋白,经SDS-PAGE电泳显示相对分子质量在17 kD附近有单一条带,且与理论分子质量一致.TAT-nNOS1-133可以进入神经细胞,并减少了谷氨酸诱导的PI阳性细胞数增多.结论:成功构建了TAT-nNOS1-133的原核表达系统并建立了其分离纯化方案.TAT-nNOS1-133可以进入细胞并且减轻了脑卒中病理模型谷氨酸诱导的兴奋性毒性.
关键词： TAT-nNOS1-133 分离纯化 脑卒中 重组蛋白
