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多烯磷脂酰胆碱对胃癌奥沙利铂耐细胞株BGC823/L-OHP耐药逆转作用的研究
目的 探讨多烯磷脂酰胆碱(PPC)对胃癌耐奥沙利铂(L-OHP)细胞株BGC823/L-OHP的增殖抑制、逆转耐药作用及可能机制.方法 采用CCK-8法检测不同浓度PPC(0、0.5、1.5、3、6、12、24、48、64、86μmol/L)处理BGC823/L-OHP细胞的增殖率,并检测不同浓度PPC(1、5、10 μmol/L)联合不同浓度L-OHP(1、5、10、20、30、40 μg/ml)处理BGC823细胞和BGC823/L-OHP细胞48 h的增殖抑制率,检测L-OHP的半数抑制浓度(IC50)和逆转耐药作用,同时选取IC50小时PPC浓度作为后续实验浓度.实时荧光定量PCR(QPCR)和Western blotting检测Toll样受体-4(TLR-4)、Nanog和ABCF2的mRNA和蛋白表达情况.结果 0.5～48 μmol/L PPC能促进BGC823/L-OHP细胞增殖,64、86 μmol/L PPC可抑制BGC823/L-OHP细胞增殖.经PPC处理,L-OHP作用48 h的IC50由28.54 μg/ml下降至6.63 μg/ml,逆转倍数为4.31.5μmol/L PPC能显著增加L-OHP对BGC823/L-OHP细胞的敏感性,选取该浓度用于后续实验.与BGC823组比较,BGC823/L-OHP组中ABCF2、TLR-4和Nanog的mRNA和蛋白水平显著上调(P＜0.05);经5μmol/L PPC处理后,BGC823/L-OHP组中ABCF2、TLR-4和Nanog的mRNA和蛋白水平显著下调(P＜0.05).结论 PPC联合L-OHP能够增加BGC823/L-OHP细胞株对L-OHP的敏感性,抑制细胞生长,从而逆转耐药.其机制可能是通过影响TLR-4、Nanog和ABCF2表达来发挥逆转耐药的作用.
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阻断PD-L1在增强奥沙利铂治疗原发性肝细胞肝癌疗效中的实验研究
目的 初步探讨阻断程序性死亡-配体1 (programmed death-ligand 1,PD-L1)在增强奥沙利铂(oxaliplatin,L-OHP)治疗原发性肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)疗效中的作用及其分子机制.方法 L-OHP处理人HCC细胞系HepG2后,qRT-PCR和Western blot检测PD-L1在mRNA及蛋白水平的表达变化,以及细胞外调节蛋白激酶1/2 (extracellular regulated protein kinases,ERK1/2)磷酸化水平的改变;建立Hepa1-6细胞C57BL/6J小鼠HCC移植瘤模型,随机分为对照组、L-OHP组、PD-L1单抗组、L-OHP+PD-L1单抗组,计算处理后各组小鼠肿瘤的质量、抑制率和生存时间;体外刺激或抑制HepG2细胞系ERK1/2的磷酸化,L-OHP处理后qRT-PCR和Westem blot检测PD-L1的表达变化.结果 L-OHP能显著抑制HepG2细胞系的生长,其ICs0分别为20.94 mg/L;L-OHP处理HepG2细胞后,p-ERK1/2和PD-L1的表达量均高于对照组(P＜0.05).小鼠HCC移植瘤模型中,与对照组、L-OHP组和PD-L1单抗组相比较,L-OHP+PD-L1单抗组的肿瘤质量显著减小(P＜0.05),肿瘤抑制率大幅提升(P＜0.05),生存时间明显延长(P＜0.05).体外刺激ERK1/2的磷酸化后,PD-L1表达显著上调,而抑制HCC细胞株ERK1/2的磷酸化后,L-OHP诱导PD-L1表达升高效应明显受到抑制.结论 L-OHP能通过提高ERK1/2磷酸化水平上调HCC细胞的PD-L1表达,从而导致治疗失败,而联合PD-L1单抗可显著增强L-OHP的抗HCC作用.
