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ICSI导致小鼠胚胎雄原核H3K9甲基化异常以及胚胎发育迟缓
目的:以小鼠为模型,评估卵细胞胞质内单精子注射(ICSI)技术的安全性. 方法:模拟临床ICSI技术,通过孤雌激活、免疫荧光、胚胎移植、早期植入点检测、中期顶臀径检测等实验方法综合评估该技术. 结果:ICSI导致小鼠植入前胚胎发育能力显著下降,尤其是8细胞之后的胚胎发育率下降极显著(P＜0.01),而且在ICSI胚胎的雄原核上检测到异常的H3K9双甲基化荧光.进一步检测移植后的ICSI胚胎发育情况,结果显示,与对照(正常受精)相比,E5.5d早期植入率无显著差异(P=0.6),但是E9.5d的“正常胚胎”百分率却显著降低(P＜0.01),即使在这些“正常的ICSI胚胎”中也出现了高比例的发育滞后现象. 结论:ICSI有可能通过对雄原核H3K9双甲基化的影响进而影响胚胎生长发育.
关键词： 卵细胞胞质内单精子注射 H3K9甲基化 植入前胚胎发育 发育滞后 小鼠 -
生长抑制因子2在植入前小鼠胚胎发育中的作用
目的 探讨生长抑制因子2 (Ing2)在小鼠植入前胚胎中的表达及生物学功能.方法 使用ICR小鼠进行促进排卵以获得植入前胚胎.采用免疫荧光方法对Ing2蛋白在小鼠植入前胚胎中的定位进行研究,采用显微注射Ing2-esiRNA实验对其在早期胚胎中的功能进行研究.抽提小鼠囊胚期合子的RNA反转录为cDNA,进行实时PCR分析.结果 免疫荧光结果显示Ing2蛋白在小鼠植入前胚胎中定位于胞浆及胞核.从4-cell期胚胎开始,胞核中的表达量明显增高.Ing2-esiRNA显微注射实验显示在小鼠合子中干扰Ing2后,各期胚胎形成率均显著低于对照组(4-cell期胚胎比率:82.7％ vs.94.7％;桑葚胚比率:67.3％vs.89.4％；囊胚形成率:48.7％ vs.75.8％)(P＜0.01).结论 Ing2的下调,引起植入前小鼠胚胎发育阻滞.
