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应用iTRAQ质谱分析技术对小鼠精原干细胞标志物进行动态研究与筛选
目的:利用iTRAQ蛋白质质谱分析技术检测各年龄阶段小鼠精原干细胞(SSCs)蛋白的表达,进一步分析SSCs标志物表达的动态变化,运用生物信息学蛋白质组数据库筛选并发现新的标志物. 方法:以健康雄性C57BL/6小鼠为研究对象,按照鼠龄不同分为8组,无菌提取各组小鼠睾丸组织,采用复合酶消化、免疫磁珠分选(MACS)的方法纯化SSCs后提取蛋白,利用双向电泳及蛋白质质谱分析技术并结合蛋白质数据库对各组蛋白质进行分析鉴定. 结果:质谱实验共得到谱图248 510张,通过Mascot软件进行分析,共鉴定到1 132种蛋白.以蛋白丰度差异倍数达到1.2倍以上,且经统计学检验P＜0.05视为存在差异性蛋白,8组共检测到差异蛋白298种.鉴定到目前已知的SSCs标志物9种(PCNA、GFRα1、CDH1、Annexin A7、UCHL1、VASA、CD49f、CD29、PLZf),通过各组对比获得在不同鼠龄段内表达变化趋势,其中GFRα1、CD49f、CD29在SSCs中的变化趋势与以往文献一致,并筛选出10种蛋白质(P63、CD71、CD98、K19、ACE、K18、K15、K17、SH2、SH3)作为SSCs标志物进一步研究的对象. 结论:SSCs内的蛋白随着小鼠鼠龄的变化表达存在差异,iTRAQ蛋白质质谱分析技术可以对SSCs蛋白质组学信息进行分析与比较,获得各鼠龄阶段差异性表达蛋白,为进一步分析和研究这些差异性蛋白的功能与作用提供了新的方法.
关键词： 精原干细胞 蛋白质组学 生物标记物 相对和绝对定量的等量异位标签 -
相对和绝对定量的等量异位标签多重标记串联质谱技术在人外周血单个核细胞蛋白质组学中的应用
建立并优化人外周血单个核细胞蛋白质组学分析所需的相对和绝对定量的等量异位标签( iTRAQ)多重标记技术,为进一步研究奠定基础.分离人外周血单个核细胞(hPBMC),抽提细胞总蛋白,经胰酶消化后进行iTRAQ标记和串联质谱检测.通过3次重复试验,每次随机选取30个前体离子进行质谱检测,检测到带有iTRAQ标记报告基团的肽段分别为26、28和29个,标记效率为86.7%～96.7%,且组间差异无统计学意义(P＞0.05);不同蛋白的肽段相对定量比值的变异系数为7.6%～25.5%,且组间差异无统计学意义(P＞0.05);同一蛋白的不同肽段相对定量比值的变异系数为9.3%～19.1%,且组间差异无统计学意义(P＞0.05).结果表明iTRAQ多重标记串联质谱技术可用于 hPBMC 蛋白的标记,且标记效率高,重复性和准确性好,为进一步研究多种自身免疫性疾病患者的 PBMC定量蛋白质组学奠定了基础.
关键词： 相对和绝对定量的等量异位标签 人外周血单个核细胞 蛋白质组学 质谱
